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鼻内滴注烟草提取物和脂多糖建立慢性阻塞性肺疾病小鼠模型的评价 预览
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作者 梁小波 吴德洪 +3 位作者 张沄 李国平 《吉林大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1454-1458,I0022,共6页
目的:建立鼻内滴注烟草提取物(CSE)和脂多糖(LPS)制备慢性阻塞性肺疾病(COPD)小鼠模型,并探讨其可行性。方法:24只C57BL/6J雄性小鼠随机分为对照组和模型组,每组12只,鼻内滴注CSE和LPS建立COPD小鼠模型,测定2组小鼠支气管肺泡灌洗液(BA... 目的:建立鼻内滴注烟草提取物(CSE)和脂多糖(LPS)制备慢性阻塞性肺疾病(COPD)小鼠模型,并探讨其可行性。方法:24只C57BL/6J雄性小鼠随机分为对照组和模型组,每组12只,鼻内滴注CSE和LPS建立COPD小鼠模型,测定2组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数、中性粒细胞数和巨噬细胞数,观察2组小鼠肺组织病理学表现并测定PAS阳性细胞数、肺泡平均内衬间隔(MLI)和肺泡破坏指数(DI),Western blotting法检测2组小鼠肺组织中E-cadherin、Vimentin和α-SMA蛋白表达水平。结果:实验4和6周时模型组小鼠BALF中细胞总数、中性粒细胞数和巨噬细胞数明显高于对照组(P<0.01),模型组小鼠肺组织出现典型粘液高分泌和肺气肿改变;实验4和6周时模型组小鼠PAS阳性细胞数、肺泡MLI(P<0.01)和DI(P<0.01)明显高于对照组;与对照组比较,实验4和6周时模型组小鼠肺组织中E-cadherin蛋白表达水平降低(P<0.01),Vimentin和α-SMA蛋白表达水平升高(P<0.01)。结论:采用鼻内滴注CSE和LPS的方法可在较短时间内建立COPD小鼠模型。 展开更多
关键词 慢性阻塞性肺疾病 疾病模型 动物 烟草提取物 脂多糖 支气管肺泡灌洗液
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白藜芦醇对中性粒细胞性哮喘小鼠肺组织炎症的抑制作用及其机制 预览 被引量:2
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作者 冉琴 张雷 +6 位作者 张沄 邱玉环 袁谢芳 唐红梅 李国平 《吉林大学学报:医学版》 CSCD 北大核心 2018年第5期897-902,共6页
目的:探讨白芦藜醇对中性粒细胞性哮喘小鼠肺组织炎症的抑制作用,并阐明其作用机制。方法:选取18只C57BL/6J雌性小鼠,采用脂多糖(LPS)+卵白蛋白(OVA)联合致敏方法建立中性粒细胞性哮喘小鼠模型,随机分为模型组(LPS+OVA组)、白藜芦醇组(... 目的:探讨白芦藜醇对中性粒细胞性哮喘小鼠肺组织炎症的抑制作用,并阐明其作用机制。方法:选取18只C57BL/6J雌性小鼠,采用脂多糖(LPS)+卵白蛋白(OVA)联合致敏方法建立中性粒细胞性哮喘小鼠模型,随机分为模型组(LPS+OVA组)、白藜芦醇组(Res组,于激发前2h灌胃30mg·kg-1白藜芦醇)和N-乙酰半胱氨酸组(NAC组,于激发前2h灌胃3mmol·kg-1N-乙酰半胱氨酸);同时选取6只同周龄小鼠作为正常对照组(PBS组)。于乙酰甲胆碱雾化期间观察各组小鼠的行为学变化,采用肺功能仪分析小鼠气道高反应(AHR),光学显微镜观察支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数和炎症细胞,HE染色观察各组小鼠肺组织病理形态表现,酶联免疫法(ELISA)检测各组小鼠BALF上清中白细胞介素17(IL-17)水平,特异性荧光探针DCF-DA染色分析肺组织活性氧(ROS)水平,丙二醛(MDA)试剂盒检测肺组织匀浆中MDA水平。结果:与PBS组比较,LPS+OVA组小鼠Penh值、细胞总数、炎症细胞、气道炎症及评分均明显升高(P<0.05 或P<0.01),BALF上清中IL-17水平明显升高(P<0.01),肺组织内ROS荧光强度明显升高,肺匀浆中MDA水平明显升高(P<0.01)。与LPS+OVA组比较,Res组和NAC组小鼠Penh值、细胞总数、炎症细胞、气道炎症及评分明显降低(P<0.05或P<0.01),BALF上清中IL-17水平均明显降低(P<0.05),肺组织内ROS荧光强度降低,肺匀浆中MDA水平明显降低(P<0.01)。结论:白藜芦醇能够有效抑制中性粒细胞性哮喘小鼠肺组织中的炎症反应,其机制可能与白藜芦醇抑制体内发生的氧化应激反应有关。 展开更多
关键词 中性粒细胞性哮喘 白藜芦醇 炎症 氧化应激
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Lyn对屋尘螨诱导的人支气管上皮细胞中MUC5AC表达的影响及其机制 预览
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作者 蓝楠 +3 位作者 唐红梅 袁谢芳 李国平 《吉林大学学报:医学版》 CSCD 北大核心 2018年第2期211-215,共5页
目的:探讨Lyn对屋尘螨(HDM)诱导的人支气管上皮细胞中MUC5AC表达的影响,并初步阐明其可能的相关作用机制。方法:选取人支气管上皮16HBE细胞,将其分为PBS组(给予PBS)和HDM组(给予1μg·L-1 HDM),采用脂质体转染法将Lynsi... 目的:探讨Lyn对屋尘螨(HDM)诱导的人支气管上皮细胞中MUC5AC表达的影响,并初步阐明其可能的相关作用机制。方法:选取人支气管上皮16HBE细胞,将其分为PBS组(给予PBS)和HDM组(给予1μg·L-1 HDM),采用脂质体转染法将LynsiRNA分别转至PBS组和HDM组细胞。构建人MUC5AC启动子荧光素酶报告基因,采用Promega双荧光素酶报告基因试剂盒检测相对荧光素酶活性(RLU),采用免疫荧光法检测16HBE细胞中MUC5AC的表达,并在共聚焦显微镜下观察。采用Western blotting法检测16HBE细胞中STAT6的表达水平。结果:双荧光素酶报告基因检测,HDM组16HBE细胞中MUC5AC启动子的RLU高于PBS组(P<0.05);与未干扰时比较,LynsiRNA干扰后HDM组RLU明显升高(P<0.05)。免疫荧光法检测,HDM组MUC5AC表达水平高于PBS组(P<0.05);与未干扰时比较,LynsiRNA干扰后HDM组MUC5AC表达水平升高(P<0.05)。Western blotting法检测,LynsiRNA干扰后,HDM组细胞中STAT6表达水平升高(P<0.05)。结论:Lyn缺失能增加人支气管上皮细胞中MUC5AC的表达,其机制可能与Lyn调控STAT6信号途径有关。 展开更多
关键词 LYN 屋尘螨 人支气管上皮细胞 MUC5AC STAT6
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Lyn激酶对肺腺癌EGFR下游信号通路的调节作用研究 预览
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作者 戴曦 李国平 +3 位作者 杨小琼 伍娟 梁丽娴 《中国癌症杂志》 CSCD 北大核心 2018年第1期43-49,共7页
背景与目的:目前,酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitors,TKI)应用于存在表皮生长因子受体(epithelial growth factor receptor,EGFR)突变的患者虽然取得了重大突破,但大约70%的患者仍难以避免地出现TKI耐药,治疗效果不尽... 背景与目的:目前,酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitors,TKI)应用于存在表皮生长因子受体(epithelial growth factor receptor,EGFR)突变的患者虽然取得了重大突破,但大约70%的患者仍难以避免地出现TKI耐药,治疗效果不尽人意。本研究通过研究Lyn激酶对EGFR突变肺腺癌细胞株的调节作用,探讨Lyn激酶对EGFR下游信号通路的影响,以期寻找新的分子靶点,提高肺癌的临床诊治水平。方法:采用慢病毒转染方法构建Lyn激酶高表达的EGFR突变细胞株Hcc827(Hcc827-Lyn^+/+),通过裸鼠荷瘤实验、MTT实验、克隆实验、侵袭实验及蛋白[质]印迹法(Western blot),检测高表达Lyn激酶的Hcc827细胞株移植于裸鼠皮下后的生长状况,以及Lyn激酶高表达Hcc827细胞株在体外培养时增殖、克隆、侵袭能力及EGFR下游信号通路相关蛋白的表达水平。结果:与Hcc827细胞株比较,Hcc827-Lyn^+/+细胞株在裸鼠荷瘤实验中表现出更强的增殖能力,但各组荷瘤裸鼠均未见明显远处转移。体外培养时,Hcc827-Lyn^+/+细胞株增殖、克隆及侵袭能力强于Hcc827细胞株。Hcc827-Lyn^+/+细胞株EGFR及其下游PI3K/AKT、JAK/STAT信号通路相关蛋白表达上调。结论:Lyn激酶高表达能通过EGFR下游信号通路上调EGFR突变肺腺癌细胞株的增殖、侵袭能力。 展开更多
关键词 Lyn激酶 肺腺癌 表皮生长因子受体 裸鼠 增殖 侵袭
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25羟维生素D3与抗菌肽在反复上呼吸道感染中的作用研究及相关性分析 预览 被引量:13
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作者 罗光燕 杨小琼 +4 位作者 袁谢芳 李国平 《重庆医学》 CAS 北大核心 2016年第29期4053-4055,4058共4页
[摘要]目的探讨25羟维生素D3与抗菌肽在反复上呼吸道感染的作用。方法选择连续3年就诊的上呼吸道感染患者,其中,1年上呼吸道感染次数大于或等于2次患者46例,男20例,女26例,平均(32.35±9.10)岁;选择15例人作为对照组,平... [摘要]目的探讨25羟维生素D3与抗菌肽在反复上呼吸道感染的作用。方法选择连续3年就诊的上呼吸道感染患者,其中,1年上呼吸道感染次数大于或等于2次患者46例,男20例,女26例,平均(32.35±9.10)岁;选择15例人作为对照组,平均(31.35±10.20)岁,对照组在年龄上与上呼吸道感染患者差异无统计学意义(P〉0.05)。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测外周血血清中25羟维生素D3水平和诱导痰上清液抗菌肽LD37水平并做相关性分析。用人气道上皮细胞株分析25羟维生素D3对抗菌肽LL-37水平影响。结果反复上呼吸道感染患者外周血血清25羟维生素D3水平低于对照组(P〈0.05),并且反复上呼吸道感染患者诱导痰上清液人抗菌肽LL-37水平低于对照组(P〈O.05)。上呼吸道感染平均次数与上呼吸道感染患者外周血25羟维生素D3呈负相关(r=-0.54,P〈0.05),上呼吸道感染平均次数与诱导痰上清液抗菌肽LL-37水平呈负相关(r=-0.65,P〈0.05),上呼吸道感染患者外周血25羟维生素D3和诱导谈上清液抗菌肽LL-37水平呈正相关(r=0.59,P〈0.05)。体外细胞实验显示I,25羟维生素D3能上调上皮细胞抗菌肽LL-37表达。结论25羟维生素D3的缺乏可能是上呼吸道反复感染患抗菌肽LL-37的表达下调的重要原因。 展开更多
关键词 反复上呼吸道感染 25羟维生素D3 抗菌肽LL-37
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人MUC5AC启动子荧光报告基因的构建与分析 预览 被引量:1
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作者 蓝楠 +2 位作者 张沄 李国平 《海南医学》 CAS 2016年第15期2409-2412,共4页
目的构建人MUC5AC启动子荧光报告基因并进行分析。方法 PCR技术克隆人MUC5AC启动子[(-1 300)+48bp]长度片段的基因,将纯化的PCR产物与T载体连接,然后将连接产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,并利用酶切和测序进行重组质粒鉴定;将该重... 目的构建人MUC5AC启动子荧光报告基因并进行分析。方法 PCR技术克隆人MUC5AC启动子[(-1 300)+48bp]长度片段的基因,将纯化的PCR产物与T载体连接,然后将连接产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,并利用酶切和测序进行重组质粒鉴定;将该重组质粒克隆至p GL3-ehancer荧光报告基因载体上,用脂质体转染法将荧光报告基因转染至人支气管上皮细胞(16HBE细胞),分别用1 ng/m L的重组细胞因子IL-4和IL-13刺激细胞24 h,并设不做任何处理的对照组;用Promega双荧光素酶报告基因检测试剂盒检测相对荧光素酶活性(Rlus1/Rlus2)。结果人MUC5AC启动子荧光报告基因构建成功,IL-4和IL-13刺激组的相对荧光素酶活性均高于对照组[IL-4(21.666 7±2.081 67),IL-13(26.567 8±1.527 53),对照组(8.33±1.527 53);F=89.815,P=0.000]。结论 MUC5AC启动子核心区域为(-1 300)+48bp范围,IL-4和IL-13可作用于该区域并促进MUC5AC高表达。 展开更多
关键词 MUC5AC 启动子 荧光报告基因 IL-4 IL-13
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氧化应激DNA损伤在重症肺炎中的作用研究 被引量:3
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作者 杨小琼 李国平 +5 位作者 戴曦 媛媛 陈媛媛 谢桃 伍娟 《国际呼吸杂志》 2016年第17期1308-1313,共6页
目的研究肺炎患者机体中氧化应激程度、抗氧化能力及其细胞DNA损伤情况的相应改变,探讨氧化应激-DNA损伤在肺炎中可能发生的作用。方法收集2011年6月至2012年3月泸州医学院附属医院呼吸内科住院部肺炎患者67例(肺炎组35例,重症肺炎... 目的研究肺炎患者机体中氧化应激程度、抗氧化能力及其细胞DNA损伤情况的相应改变,探讨氧化应激-DNA损伤在肺炎中可能发生的作用。方法收集2011年6月至2012年3月泸州医学院附属医院呼吸内科住院部肺炎患者67例(肺炎组35例,重症肺炎组32例),招募32名健康志愿者作为正常对照组。对其中3名志愿者及3例肺炎组患者分别行经纤维支气管镜气道组织钳取活检观察气道组织氧化应激及炎症细胞浸润情况,对剩余64例患者及32名志愿者分别行无菌静脉取血2ml,分离外周血单个核细胞(peripheralbloodmononuclearcell,PBMC)测定各组细胞氧化应激程度,DNA损伤情况,留取血清测定各组抗氧化水平。结果①肺炎组支气管气道组织炎症细胞浸润明显多于正常对照组;②肺炎组支气管气道组织ROS红色荧光强度明显强于正常对照组;③肺炎组、重症肺炎组细胞ROS平均荧光强度均高于正常对照组,分别为3.308±0.240、6.628士0.349、1.505±0.352(P〈0.01);肺炎组、重症肺炎组细胞ROS平均光密度值均高于正常对照组,分别为0.913±0.065、1.260土0.023、0.390±0.031(P〈0.01);④肺炎组、重症肺炎组细胞平均拖尾长度均高于正常对照组,分别为6.783±5.015、30.363±7.436、0.095土0.123(PGO.05);⑤肺炎组、重症肺炎组血清SOD平均光密度值均低于正常对照组,分别为0.225±0.030、0.159±0.033、0.456±0.024(P〈0.01)。人外周血单个核细胞彗星平均拖尾长度与细胞ROS平均荧光强度(r=0.878,P〈0.01)、平均光密度(r=0.815,PG0.01)均呈显著正相关。人外周血血清SOD平均光密度值与细胞ROS平均荧光强度(r=-0.847,P〈0.01)、平均光密度值(r=-0.952,P〈0.01)均呈显著负相关。结论①肺炎患者气道组织及外周血存在氧化应激,氧化与抗氧化失衡� 展开更多
关键词 肺炎 氧化应激 超氧化歧化酶 DNA损伤
重组屋尘螨变应原突变体的免疫原性与过敏原性研究
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作者 杨小琼 戴曦 +1 位作者 李国平 《国际免疫学杂志》 CAS 2016年第1期8-13,共6页
目的 构建屋尘螨Der p2变应原突变体的原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达、纯化,以观察屋尘螨Der p2变应原突变体的免疫原性以及抗原性.方法 基因敲除屋尘螨Der p2变应原的部分氨基酸残基序列,将编码基因定向克隆到pET32a原核表达质粒中... 目的 构建屋尘螨Der p2变应原突变体的原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达、纯化,以观察屋尘螨Der p2变应原突变体的免疫原性以及抗原性.方法 基因敲除屋尘螨Der p2变应原的部分氨基酸残基序列,将编码基因定向克隆到pET32a原核表达质粒中,转入BL21表达菌中并提纯;将18只Balb/c小鼠随机分为Der p2变应原突变体组、重组Der p2组和对照组.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定各组小鼠血清中IgE、IgG1与IgG2a抗体变化,用免疫斑点试验测定Der p2突变体的IgE结合能力.结果 成功构建了Der p2变应原突变体的原核表达质粒,表达并纯化了Der p2变应原突变体.腹腔免疫后0d,各组IgE、IgG1与IgG2a抗体表达无明显变化(P=0.067、P=0.052、P=0.078);免疫后第7d,重组Der p2变应原组诱导IgE抗体的产生量高于Der p2变应原突变体组(P =0.002),重组Der p2变应原组诱导的IgG2a抗体高于Der p2变应原突变体组(P=0.0056);腹腔免疫后第14 d,重组Der p2变应原组IgE抗体的产生量高于Der p2变应原突变体组(P=0.001),Der p2变应原突变体组IgG2a低于重组Der p2变应原组(P=0.0034).Der p2变应原突变体与屋尘螨过敏患者的阳性血清结合明显较低.结论 Der p2变应原突变体能诱导小鼠产生IgG1抗体和IgG2a抗体,同时能明显减少IgE抗体的产生,并且Der p2变应原突变体具有较低的IgE结合能力. 展开更多
关键词 屋尘螨 Der p2变应原 免疫原性 过敏原性
甲泼尼龙对慢性咳嗽患者诱导痰巨噬细胞中Toll样受体2表达的影响 被引量:1
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作者 汤长文 罗丽 +3 位作者 陈菊屏 李国平 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期123-127,共5页
目的 探讨Toll样受体2(TLR2)在慢性咳嗽患者诱导痰巨噬细胞中的表达与气道炎症的关系以及甲泼尼龙对TLR2表达的影响.方法 收集2008年9月至2010年3月泸州医学院附属医院呼吸科门诊的慢性咳嗽患者86例,其中咳嗽变异性哮喘(CVA)组31例... 目的 探讨Toll样受体2(TLR2)在慢性咳嗽患者诱导痰巨噬细胞中的表达与气道炎症的关系以及甲泼尼龙对TLR2表达的影响.方法 收集2008年9月至2010年3月泸州医学院附属医院呼吸科门诊的慢性咳嗽患者86例,其中咳嗽变异性哮喘(CVA)组31例,上气道咳嗽综合征(UACS)组14例,嗜酸细胞性支气管炎(EB)组16例,胃食管反流性咳嗽(GERC)组25例.对照组为20名健康志愿者.各组均行痰液诱导检查,HE染色,免疫荧光染色测定TLR2表达,酶联免疫吸附法(ELISA)测定诱导痰上清液中细胞因子的浓度.结果 (1)CVA、UACS、EB和GERC各组患者诱导痰中细胞总数[分别为(3.4±1.1)×106/L、(2.6±0.6)×106/L、(2.6±0.6)×106/L、(2.7±0.5)×106/L]均明显高于对照组[(1.4±0.6)×106/L],差异均有统计学意义(均P<0.01) 分类计数显示以上4组痰中巨噬细胞比例(分别为0.35±0.04、0.40±0.06、0.38±0.04、0.43±0.05)均明显低于对照组(0.63±0.08) 中性粒细胞比例(分别为0.52±0.06、0.58±0.06、0.52±0.04、0.54±0.06)明显高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.01).CVA和EB组患者嗜酸细胞比例(分别为0.115±0.054和0.099±0.034)明显高于其他各组,差异有统计学意义(均P<0.01),但两组间差异无统计学意义(t=1.18,P>0.05).(2)CVA、UACS、EB和GERC各组患者诱导痰上清液白细胞介素-8浓度[分别为(7.0±1.2)μg/L、(10.2±3.1)μg/L、(6.3±1.9)μg/L、(7.7±2.5)μg/L]和肿瘤坏死因子-α浓度[分别为(30±11)ng/L、(46±16)ng/L、(2l±5)ng/L、(33±15)ng/L]明显高于对照组[分别为(1.6±0.8)μg/L和(13±6)ng/L],差异均有统计学意义(均P<0.01).(3)CVA、UACS、EB和GERC各组患者诱导痰上清液中白细胞介素-8与痰中中性粒细胞数呈正相关(r值分别为0.628、0.816、0.769、0.733,均P<0.05) CVA、UACS、EB和GERC各组患者诱导痰上清液中 展开更多
关键词 咳嗽 巨噬细胞 TOLL样受体2 甲泼尼龙
STAT6报告基因的构建与在成纤维细胞中表达 预览
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作者 皮爽 +3 位作者 刘春华 罗丽 李国平 熊瑛 《泸州医学院学报》 2009年第1期 14-17,共4页
目的构建携带信号转导子与转录活化子6(STAT6)基因的真核表达载体,为进一步研究STAT6转录因子在肺纤维化中的作用与作用机制提供基础。方法:以含有STAT6的基因文库为模板通过PCR反应扩增出该基因的全序列cDNA,并克隆到增强型绿色... 目的构建携带信号转导子与转录活化子6(STAT6)基因的真核表达载体,为进一步研究STAT6转录因子在肺纤维化中的作用与作用机制提供基础。方法:以含有STAT6的基因文库为模板通过PCR反应扩增出该基因的全序列cDNA,并克隆到增强型绿色荧光报告基因的真核表达质粒中,经酶切鉴定及测序分析对重组质粒pEGFP-STAT6作进一步鉴定。将重组质粒pEGFP—STAT6转染到成纤维细胞中。结果:STAT6基因能正确克隆到真核表达载体pEGFP-C1中,构建成重组质粒pEGFP—STAT6。STAT6基因在成纤维细胞中表达。结论:成功构建pEGFP—stat6重组质粒。并在成纤维细胞中表达。 展开更多
关键词 信号转导子与转录活化子6 成纤维细胞 真核表达载体
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