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浙江省1例携带白喉棒状杆菌病例的病原学特征
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作者 姚苹苹 韦俊超 +6 位作者 玲玲 朱函坪 陈晨 何寒青 卢杭景 陈建才 项海青 《中国疫苗和免疫》 北大核心 2019年第3期273-275,280共4页
目的对浙江省1例携带白喉棒状杆菌病例进行病原学诊断。方法采集患者咽拭子、鼻咽拭子和支气管肺泡灌洗液标本各1份,进行白喉棒状杆菌分离培养、涂片染色鉴定、生化和蛋白鉴定以及样本核酸的白喉棒状杆菌toxA和toxB毒力基因检测。结果... 目的对浙江省1例携带白喉棒状杆菌病例进行病原学诊断。方法采集患者咽拭子、鼻咽拭子和支气管肺泡灌洗液标本各1份,进行白喉棒状杆菌分离培养、涂片染色鉴定、生化和蛋白鉴定以及样本核酸的白喉棒状杆菌toxA和toxB毒力基因检测。结果从患者的支气管肺泡灌洗液分离到1株白喉棒状杆菌,革兰染色呈阳性,菌体排列呈棒状,粗细不一;奈瑟染色见菌体一端或两端特异性异染颗粒;生化和蛋白鉴定均提示99.0%以上概率属白喉棒状杆菌;患者的采集样本和分离菌株的核酸白喉棒状杆菌toxA和toxB毒力基因检测结果均为阴性。结论本病例携带的白喉棒状杆菌为不带有毒素生物结构基因编码菌,该病例为无毒白喉棒状杆菌带菌者。 展开更多
关键词 白喉 白喉棒状杆菌 毒力基因 病原学特征
副溶血性弧菌实时重组酶聚合酶扩增检测技术研究 预览 被引量:1
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作者 占利 徐昌平 +5 位作者 张云怡 陈鸿鹄 张政 陈建才 张俊彦 玲玲 《预防医学》 2019年第7期653-657,共5页
目的建立快速检测副溶血性弧菌的实时重组酶聚合酶扩增技术(RPA)。方法根据副溶血性弧菌tlh基因保守序列设计筛选引物及探针,建立检测副溶血性弧菌的实时RPA方法。通过检测不同浓度副溶血性弧菌标准株DNA模板评价方法灵敏度,通过检测不... 目的建立快速检测副溶血性弧菌的实时重组酶聚合酶扩增技术(RPA)。方法根据副溶血性弧菌tlh基因保守序列设计筛选引物及探针,建立检测副溶血性弧菌的实时RPA方法。通过检测不同浓度副溶血性弧菌标准株DNA模板评价方法灵敏度,通过检测不同种属弧菌及其他细菌标准株评价方法特异度,通过重复试验评价方法稳定性,通过实样检测评价方法应用效果。结果建立的实时RPA方法在39℃恒温下20min内完成副溶血性弧菌扩增,最低检测限为5pg/反应,与其他致病菌无交叉反应,不同浓度的副溶血性弧菌DNA模板和大肠杆菌DNA模板隔日3次实时RPA检测结果一致,实时RPA对51份鲜活/冰鲜鱼、虾、贝、蟹类样品的检测结果与GB4789.7—2013《食品微生物学检验副溶血性弧菌检验》检测结果一致。结论建立的实时RPA方法可定性检测副溶血性弧菌,且实验操作及结果判读简单,适用于突发公共卫生事件、食品安全监管中的副溶血性弧菌快速检测。 展开更多
关键词 副溶血性弧菌 重组酶聚合酶扩增技术 检测 tlh基因
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基于16S rDNA高通量测序技术的酱卤熟肉制品细菌多样性研究
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作者 占利 玲玲 +3 位作者 张俊彦 陈建才 张云怡 张政 《中国卫生检验杂志》 CAS 2019年第8期905-909,共5页
目的探讨不同包装类型、不同品种肉类来源酱卤熟肉制品中的菌群组成及丰度。方法提取散装及预包装酱卤熟肉制品中的细菌基因组DNA,应用高通量测序技术对样品中细菌16S rDNA V4变异区域进行测序,分析样品中微生物群体分布和丰度、以及不... 目的探讨不同包装类型、不同品种肉类来源酱卤熟肉制品中的菌群组成及丰度。方法提取散装及预包装酱卤熟肉制品中的细菌基因组DNA,应用高通量测序技术对样品中细菌16S rDNA V4变异区域进行测序,分析样品中微生物群体分布和丰度、以及不同样品中的菌群差异。结果不同酱卤熟肉样品菌群结构各不相同且差异较大,其中弧菌属丰度均较高,其次为不动杆菌属、希瓦菌属及嗜冷杆菌属,部分样品尚存在葡萄球菌属、沙门菌属及李斯特菌属等食源性致病菌成分。Alpha多样性结果显示,所有样品菌群丰富度及均匀度均较高,散装样品菌群丰富度明显高于预包装样品;Beta多样性分析发现散装与预包装样品组间菌群差异有统计学意义,散装样品中菌群OTU数明显多于预包装样品。结论高通量深度测序技术可快速精确地掌握熟肉制品中微生物菌群多样性,弧菌菌属可能与酱卤类熟肉制品的变质密切相关,散装类酱卤熟肉制品微生物污染状况比预包装样品普遍要高,存在引发食源性疾病的风险。 展开更多
关键词 熟肉制品 细菌多样性 高通量测序 16S RDNA
Calderón恒等式的收敛性证明 预览
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作者 玲玲 朱月萍 《南通大学学报:自然科学版》 CAS 2019年第1期69-72,共4页
在多参数函数空间理论研究中,通过Calderón恒等式对函数进行分解是重要手段之一。首先,给出一系列实验函数,由傅里叶变换得出连续的Calderón恒等式;然后,在L^2(R^n1+n2)上运用级数收敛的定义并结合Lebesgue控制收敛定理的方... 在多参数函数空间理论研究中,通过Calderón恒等式对函数进行分解是重要手段之一。首先,给出一系列实验函数,由傅里叶变换得出连续的Calderón恒等式;然后,在L^2(R^n1+n2)上运用级数收敛的定义并结合Lebesgue控制收敛定理的方法、在S0(R^n1+n2)上运用函数分解和正交估计的方法、在对偶空间S'0(R^n1+n2)上运用对偶的方法,分别证明了Calderón恒等式成立。 展开更多
关键词 Calderón恒等式 多参数函数空间 函数分解
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吃“废”又“吐”金衢州高新区如何实现绿色发展 预览
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作者 玲玲 汪耘 《表面工程与再制造》 2019年第2期50-51,共2页
单位工业增加值能耗下降了近一半,资源产出率提高近3倍。不久前,国家发改委、财政部公布全国循环化改造示范试点验收成绩,经第三方机构组织专家复核,衢州高新技术产业园区排名第一。"作为化工企业占半数以上的园区,能够在全国大考... 单位工业增加值能耗下降了近一半,资源产出率提高近3倍。不久前,国家发改委、财政部公布全国循环化改造示范试点验收成绩,经第三方机构组织专家复核,衢州高新技术产业园区排名第一。"作为化工企业占半数以上的园区,能够在全国大考中脱颖而出,主要是我们实现了低消耗、低排放、高效率的循环发展模式。" 展开更多
关键词 绿色发展 衢州 高新技术产业园区 高新区 国家发改委 机构组织 化工企业 增加值
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温州市单核细胞增生李斯特菌的毒力基因及血清学分型和分子分型研究 被引量:1
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作者 章乐怡 +5 位作者 李毅 胡玉琴 洪程基 谢爱蓉 玲玲 张云怡 《中国食品卫生杂志》 北大核心 2018年第5期468-472,共5页
目的了解温州市近十年单核细胞增生李斯特菌分离株的血清型、毒力基因及分子分型特征。方法用聚合酶链式反应(PCR)方法对单核细胞增生李斯特菌进行血清型及毒力基因检测;用多位点序列分型(MLST)方法对单核细胞增生李斯特菌进行分子... 目的了解温州市近十年单核细胞增生李斯特菌分离株的血清型、毒力基因及分子分型特征。方法用聚合酶链式反应(PCR)方法对单核细胞增生李斯特菌进行血清型及毒力基因检测;用多位点序列分型(MLST)方法对单核细胞增生李斯特菌进行分子分型,并绘制MLST数据的最小生成树。结果 97株单核细胞增生李斯特菌分离株分为4种血清型,以血清型1/2b、1/2a为优势血清型,占比分别为48.45%(47/97)、35.05%(34/97);而毒力基因iap、prfA基因阳性率均为100.00%(97/97),hlyA、inlA基因阳性率均为97.94%(95/97),plcB基因阳性率为96.91%(94/97)。其中患者分离株5种毒力基因阳性率均为100.00%(6/6)。97株单核细胞增生李斯特菌分离株得到20个MLST型别,其中ST87型是优势型别,其次为ST121和ST9,ST1和ST779型是患者特有的,ST2、ST3、ST5型分布于食品和患者分离株。结论温州市不同来源的单核细胞增生李斯特菌分离株分子型别呈多态性,食品和患者分离株存在相同的ST型,且这些菌株大部分携带毒力基因,具有潜在的致病性,因此食品中单核细胞增生李斯特菌污染的潜在风险不容忽视。 展开更多
关键词 单核细胞增生李斯特菌 多位点序列分型 分子分型 血清学分型 毒力基因 食源性致病菌 温州
2014年浙江省淡水动物性水产品中致病性弧菌污染来源分析 被引量:5
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作者 陈鸿鹄 张云怡 +3 位作者 占利 张俊彦 陈建才 玲玲 《中国卫生检验杂志》 CAS 2018年第15期1902-1906,共5页
目的了解淡水动物性水产品养殖、销售、加工过程中弧菌的污染来源。方法在副溶血性弧菌感染高发的第二季度和第三季度,从不同的淡水动物性水产品养殖场所、销售场所、餐饮场所采取淡水鱼、水体和水底沉积物样本;采用弧菌显色法进行致病... 目的了解淡水动物性水产品养殖、销售、加工过程中弧菌的污染来源。方法在副溶血性弧菌感染高发的第二季度和第三季度,从不同的淡水动物性水产品养殖场所、销售场所、餐饮场所采取淡水鱼、水体和水底沉积物样本;采用弧菌显色法进行致病性弧菌定量检测;并完成副溶血性弧菌分离株血清型和toxR、tdh和trh基因的检测。结果副溶血性弧菌在淡水动物性水产品中的污染与场所密切相关;副溶血性弧菌分离株的血清型以O1/O2/O3/O5为主,69株副溶血性弧菌中检出3株O3∶K6血清型,4株表达tdh基因,1株表达trh基因。结论淡水产品中致病性弧菌的污染主要来源于销售加工环节。 展开更多
关键词 淡水产品 致病弧菌 副溶血性弧菌 污染来源
以经典英文电影片段活化初中英语听力课堂 预览
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作者 玲玲 《中学教学参考》 2018年第25期36-37,共2页
在初中英语听力教学中,教师可以运用经典英文电影片段活化课堂。首先可以引导学生观看英文电影海报,并要求学生进行听前预测,然后为学生播放电影片段,要求学生简要回答问题,指导学生进行填空练习,并展开听写活动等。
关键词 初中英语 经典英文电影 电影片段 听力教学
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EMA实时荧光PCR技术检测食品中单核增生李斯特活菌方法研究 预览 被引量:3
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作者 张俊彦 玲玲 +6 位作者 徐昌平 占利 陈鸿鹄 张云怡 陈建才 张政 杨勇 《中国人兽共患病学报》 CSCD 北大核心 2017年第11期1007-1012,共6页
目的 利用叠氮溴化乙錠(EMA)实时荧光PCR技术,建立直接检测食品中单增李斯特活菌的方法。方法 根据单核李斯特菌inlA基因设计特异性引物和探针。用不同EMA浓度、不同光照次数优化样品前处理条件。用平板计数法验证该方法的检出限及对... 目的 利用叠氮溴化乙錠(EMA)实时荧光PCR技术,建立直接检测食品中单增李斯特活菌的方法。方法 根据单核李斯特菌inlA基因设计特异性引物和探针。用不同EMA浓度、不同光照次数优化样品前处理条件。用平板计数法验证该方法的检出限及对死菌的抑制率。用35株单增李斯特菌、25株非单核李斯特菌、92株非李斯特菌验证该方法特异性。用添加了不同剂量的单增李斯特死菌、活菌及金黄色葡萄球菌的15件饮料,15件熟肉制品进行模拟实样检测。结果 单增李斯特活菌EMA实时荧光PCR方法的Ct=(38.46-3.30)×log(菌量)(R2=0.999)。最低检测的活菌浓度为55cfu/反应。对死菌DNA抑制效率≥99.98%。35株单增李斯特菌Ct值最低16.21,最高29.38,而25株非单单增李斯特菌、92株非单增李斯特菌的Ct值均大于35或无Ct值。重复试验Ct值变异系数小于5%。30件模拟实样单增李斯特菌的检测结果与常规方法完全一致。且EMA实时荧光PCR方法检出时间仅需10h左右,而常规分离培养方法需要5~7d。结论 EMA实时荧光PCR检测技术是一种快速、简便、特异性强、灵敏度高、仅检测单增李斯特菌活菌的有效方法,可作为食品中检测单增李斯特活菌的方法推广使用。 展开更多
关键词 单增李斯特菌 活菌 叠氮溴化乙锭(EMA) 实时荧光PCR技术
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食源性致泻大肠杆菌血清型及毒力基因的研究 预览 被引量:2
10
作者 余晓丰 杨勇 +2 位作者 占利 玲玲 陈国刚 《食品工业科技》 CSCD 北大核心 2017年第9期124-127,共4页
了解浙江地区食源性致泻大肠杆菌的血清型分布特点及毒力基因携带状况。收集食品安全风险监测点的致泻大肠杆菌分离株,采用玻片凝集法对受试菌株进行血清分型,运用多重PCR检测其携带的毒力基因。在69株受试菌株中,优势血清型包括0148... 了解浙江地区食源性致泻大肠杆菌的血清型分布特点及毒力基因携带状况。收集食品安全风险监测点的致泻大肠杆菌分离株,采用玻片凝集法对受试菌株进行血清分型,运用多重PCR检测其携带的毒力基因。在69株受试菌株中,优势血清型包括0148(16株)、0159(11株)、06(4株)、015(4株)、063(4株)和078(3株),这六种血清型菌株共计42株,占菌株,4-数的60.9%。菌株主要携带的毒力基因为astA(42株)、estlb(25株)、pie(15株)、escV(14株)、aggR(14株);最常见的毒力基因组合为astA+estlb(25株)。进一步分析发现,携带astA、estlb基因的0148和0159的菌株对食品安全存在较大威胁。浙江地区食源性致泻大肠菌的类型以EAEC和ETEC为主,携带的主要毒力基因为O,StA和estlb,优势血清型为0148和0159。 展开更多
关键词 食源性致泻大肠杆菌 多重PCR 血清型 毒力基因
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在争论中提升学生的思维品质 预览
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作者 玲玲 《数学教学通讯》 2017年第13期43-44,共2页
课堂争论,是课堂上学生在学习过程中相互表达和交流的一种方式。巧妙利用课堂争论点,不断挖掘数学课堂争论资源,有利于凸显学生创新个性,培养和提升学生的创新思维品质。本文从小学数学课堂争论的价值和如何让争论在小学数学课堂上得到... 课堂争论,是课堂上学生在学习过程中相互表达和交流的一种方式。巧妙利用课堂争论点,不断挖掘数学课堂争论资源,有利于凸显学生创新个性,培养和提升学生的创新思维品质。本文从小学数学课堂争论的价值和如何让争论在小学数学课堂上得到有效落实两个方面进行了阐述。 展开更多
关键词 小学数学 争论 思维品质
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甲型副伤寒沙门氏菌cdtB亚基的原核表达及对巨噬细胞IL-6、IL-8、TNF-α分泌的影响 预览 被引量:1
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作者 陈鸿鹄 吴圆圆 +1 位作者 占利 玲玲 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期535-538,546共5页
目的研究甲型副伤寒沙门氏菌感染过程中,cdtB对宿主巨噬细胞分泌促炎细胞因子的影响。NF-κB信号通路阻断剂对cdtB诱导的巨噬细胞分泌细胞因子的影响。方法对甲型副伤寒沙门氏菌cdtB亚基进行原核表达,制备并模型纯化重组蛋白,建立其刺激... 目的研究甲型副伤寒沙门氏菌感染过程中,cdtB对宿主巨噬细胞分泌促炎细胞因子的影响。NF-κB信号通路阻断剂对cdtB诱导的巨噬细胞分泌细胞因子的影响。方法对甲型副伤寒沙门氏菌cdtB亚基进行原核表达,制备并模型纯化重组蛋白,建立其刺激人THP-1巨噬细胞模型,ELISA检测THP-1分泌IL-6,IL-8和TNF-α等细胞因子。在共培养体系中加入NF-κB信号通路阻断剂,ELISA检测THP-1分泌IL-6,IL-8和TNF-α等细胞因子。结果成功构建甲型副伤寒沙门氏菌cdtB原核表达系统,表达并纯化重组cdtB蛋白,与空白对照相比,受到cdtB刺激的THP-1细胞上清中的IL-6,IL-8和TNF-α浓度显著上升,而在THP-1细胞培养基中加入NF-κB信号通路阻断剂SN50可以显著抑制重组cdtB诱导的IL-6、IL-8、TNF-α分泌。结论甲型副伤寒沙门氏菌cdtB能够通过NF-κB信号通路诱导巨噬细胞分泌IL-6、IL-8和TNF-α,在甲型副伤寒相关的炎症反应中发挥促进作用。 展开更多
关键词 甲型副伤寒沙门氏菌 cdtB 细胞因子 巨噬细胞
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食品中志贺活菌叠氮溴乙锭实时荧光聚合酶链反应技术研究 被引量:2
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作者 玲玲 徐昌平 +6 位作者 杨勇 占利 陈鸿鹄 张云怡 张俊彦 陈建才 程苏云 《疾病监测》 CAS 2016年第11期909-914,共6页
目的利用叠氮溴乙锭(ethidium monoazide bromide,EMA)实时荧光聚合酶链反应(PCR)技术,建立一种简便、快速、特异、灵敏的在食品中检测志贺活菌的方法。方法根据志贺菌ipa H基因保守序列设计特异性引物和探针。用不同EMA浓度、不同... 目的利用叠氮溴乙锭(ethidium monoazide bromide,EMA)实时荧光聚合酶链反应(PCR)技术,建立一种简便、快速、特异、灵敏的在食品中检测志贺活菌的方法。方法根据志贺菌ipa H基因保守序列设计特异性引物和探针。用不同EMA浓度、不同光照次数优化样品EMA前处理条件。用已知菌验证志贺活菌检测的敏感性和志贺死菌检测的抑制性。用31株志贺菌、26株单增李斯特菌、24株沙门菌、25株副溶血弧菌、11株阪崎肠杆菌、10株致病性大肠埃希菌和1株大肠埃希菌验证方法的特异性和稳定性。同时用本研究方法和常规分离培养法,对30件模拟样品进行实样验证。结果志贺活菌EMA实时荧光PCR方法的循环阈值(Ct)=32.10~3.19×log(菌量)(R2=0.994)。最低检测浓度为2.20 CFU/反应。对死菌DNA抑制效率≥99.97%。31株志贺菌Ct值最低为15.04,最高为26.54,而97株非志贺菌的Ct值均〉35或无Ct值(呈一条直线)。重复试验Ct值变异系数〈3。30件模拟样品采用本研究方法和常规分离培养法的检测结果一致,但采用EMA实时荧光PCR方法耗时不超过7.5 h,而常规分离培养方法则需要3~5 d。结论 EMA实时荧光PCR技术是一种快速简便、特异性强、灵敏度高、仅检测志贺活菌的方法,建议在食品检测中推广应用。 展开更多
关键词 食品 志贺菌 叠氮溴乙锭 实时荧光PCR
香港海鸥型菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR检测技术研究 预览 被引量:2
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作者 玲玲 张俊彦 +5 位作者 龚璞 潘军航 占利 张云怡 杨勇 吴嘉南 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期160-164,共5页
目的利用TaqMan-MGB探针的实时荧光定量PCR方法,建立一种简便、快速、特异、灵敏的香港海鸥型菌检测方法。方法根据香港海鸥型菌16SrDNA的保守区域设计特异性引物和探针。用不同浓度、不同温度对反应体系引物浓度、探针浓度及退火温度... 目的利用TaqMan-MGB探针的实时荧光定量PCR方法,建立一种简便、快速、特异、灵敏的香港海鸥型菌检测方法。方法根据香港海鸥型菌16SrDNA的保守区域设计特异性引物和探针。用不同浓度、不同温度对反应体系引物浓度、探针浓度及退火温度进行优化。用添加已知量的香港海鸥型菌样本验证方法敏感性;用香港海鸥型菌以及大肠杆菌、沙门菌、副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌等致病菌验证方法特异性和稳定性。结果当25μL反应体系中上、下游引物(10μmol/L)各为0.6μL,探针(10μmol/L)为0.4μL,模板DNA量为5.0μL,反应条件:预变性95℃20s,变性95℃10s,退火57℃40s,40个循环时,香港海鸥型菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR反应Ct值与待检菌浓度对数具有良好线性关系[Ct=-3.538×log(菌浓度)+13.56,r=0.999],方法的最低检测浓度达到36cfu/mL。23株香港海鸥型菌检测Ct值均小于35,而104株非香港海鸥型菌检测Ct值大于35或扩增曲线成一平滑直线。隔天连续5d重复试验Ct值变异系数小于3。20件活鲤鱼、18件活草鱼香港海鸥型菌检测率实时荧光PCR检测技术显著高于常规检测方法(P〈0.01,χ2=21.50)。且后者所需时间为5d,前者仅需10h。结论 TaqMan实时荧光定量PCR法是一种快速简便、特异性强、灵敏度高的香港海鸥型菌检测方法,值得推广应用。 展开更多
关键词 香港海鸥型菌 TAQMAN-MGB探针 实时荧光PCR
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基于改进的自适应局部保持投影算法的人脸识别 预览 被引量:2
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作者 玲玲 龚劬 《计算机科学》 CSCD 北大核心 2016年第8期286-291,共6页
局部保持投影(LPP)通过构造近邻图来保持样本的局部结构,在构造近邻图的过程中,LPP会遇到两个参数K和σ的选择问题。近邻图的构建对算法的识别效果起着重要的作用,因而这两个参数的选择会在很大程度上影响LPP的识别率。为了避免参数... 局部保持投影(LPP)通过构造近邻图来保持样本的局部结构,在构造近邻图的过程中,LPP会遇到两个参数K和σ的选择问题。近邻图的构建对算法的识别效果起着重要的作用,因而这两个参数的选择会在很大程度上影响LPP的识别率。为了避免参数的选择对识别率造成影响,提出了一种基于改进的自适应局部保持投影的人脸识别算法。首先,构造无参数的近邻图,其能够自适应地选取样本的近邻点并确定其相应的边权。其次,由于在计算过程中出现了矩阵维数过高的问题,因此采用QR分解进行降维处理。最后,利用共轭正交化使得投影轴具有统计不相关性,以降低特征矢量间的统计相关性,提高识别率。在ORL人脸库和YALE人脸库上进行了实验,结果表明改进的算法在识别率方面整体上好于LPP算法、DLPP算法、LMMC算法。 展开更多
关键词 近邻图 自适应局部保持投影 人脸识别 共轭正交 统计不相关 降维
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O3∶K6血清型副溶血性弧菌三重PCR检测方法的建立 预览
16
作者 张云怡 玲玲 +5 位作者 张俊彦 占利 陈建才 陈鸿鹄 张政 杨勇 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期632-635,共4页
目的建立副溶血性弧菌O3∶K6血清型三重PCR检测方法。方法基于副溶血性弧菌种特异性基因toxR,O3血清群特异性基因vp0209,K6血清型特异性基因vp0230,建立O3∶K6血清型副溶血性弧菌三重PCR检测方法。对该方法的检测特异性和灵敏度进行分... 目的建立副溶血性弧菌O3∶K6血清型三重PCR检测方法。方法基于副溶血性弧菌种特异性基因toxR,O3血清群特异性基因vp0209,K6血清型特异性基因vp0230,建立O3∶K6血清型副溶血性弧菌三重PCR检测方法。对该方法的检测特异性和灵敏度进行分析。结果与结论该方法对O3∶K6血清型副溶血性弧菌具有很好的检测特异性,灵敏度可以达到102 CFU/PCR反应体系。 展开更多
关键词 副溶血性弧菌 O3∶K6血清型 三重PCR
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一株死亡患者分离的致死创伤弧菌菌株的耐药表型与分子特征 被引量:1
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作者 潘军航 沈伟伟 +3 位作者 张严峻 占利 龚璞 玲玲 《疾病监测》 CAS 2016年第3期229-232,共4页
目的对培养分离的创伤弧菌菌株(2014-DJH)进行耐药表型与分子特征分析。方法采用全自动微生物鉴定及药敏分析系统进行生化鉴定和耐药分析;采用PCR方法检测vvh A基因和pil F基因,及vcg和16S rRNA基因分型;应用多位点序列分析进行分子... 目的对培养分离的创伤弧菌菌株(2014-DJH)进行耐药表型与分子特征分析。方法采用全自动微生物鉴定及药敏分析系统进行生化鉴定和耐药分析;采用PCR方法检测vvh A基因和pil F基因,及vcg和16S rRNA基因分型;应用多位点序列分析进行分子分型。结果分离菌株2014-DJH经生化鉴定为革兰阴性的生物1型创伤弧菌;对大多数常用抗生素都敏感,对妥布霉素中度敏感;PCR检测vvh A和pil F阳性,为vcg C-16S rRNA B(CB)基因型;菌株的多位点序列型为glp 5、gyr B 3、mdh 32、met G 68、pur M 21、dtd S 39、lys A 115、pnt A 4、pyr C 42、tna A 75。结论菌株2014-DJH为新ST型菌株,命名为ST 289,注册号为id-389。基因分型结果表明该菌具有较强的致病能力,加强创伤弧菌感染的监测与预警具有重要的意义。 展开更多
关键词 创伤弧菌 基因分型 分子特征
鼠疫耶尔森菌和假结核耶尔森菌基因鉴别方法的建立及评价
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作者 石国祥 张政 +10 位作者 玲玲 陈劲华 盛华 金大智 张志凯 王宇萌 张孝和 罗芸 孙继民 俞东征 夏连续 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期496-500,共5页
目的建立鼠疫耶尔森菌和假结核耶尔森菌基因鉴别方法。方法依据鼠疫菌、假结核菌特有的基因组序列[“疫岛(PeI)”和“假岛(Psi)”],与已公布的12株鼠疫菌和4株假结核菌全基因序列进行比对,设计特异性的引物,对鼠疫菌、假结核菌... 目的建立鼠疫耶尔森菌和假结核耶尔森菌基因鉴别方法。方法依据鼠疫菌、假结核菌特有的基因组序列[“疫岛(PeI)”和“假岛(Psi)”],与已公布的12株鼠疫菌和4株假结核菌全基因序列进行比对,设计特异性的引物,对鼠疫菌、假结核菌和其他肠道细菌进行鉴定。结果用52株鼠疫菌、57株假结核菌和其他肠道菌株进行验证,结果显示,5对鼠疫菌的鉴定引物中,2对(PeI2和PeI11)仅在52株鼠疫菌中扩出目的条带,另3对引物(PeIl、PeI3和PeI12)除鼠疫菌外在部分假结核菌株中也扩出目的条带;5对假结核菌鉴定引物中,1对引物(Psi1)在52株鼠疫菌和57株假结核菌株中扩出目的条带,4对引物(Psi7、Psi16、Psi18和Psi19)仅在57株假结核菌株中均扩出目的条带,在鼠疫菌中未扩出目的条带。结论用鼠疫菌和假结核菌共有的Psil序列、鼠疫菌特有的PeI2和PeIll序列及假结核菌特有的Psi7、Psi16、Psi18和Psi19序列组成的基因鉴别方法,可以用于鼠疫菌和假结核菌的基因快速鉴别。 展开更多
关键词 鼠疫耶尔森菌 假结核耶尔森菌 基因 鉴别
浙江省首次检出1株携带NDM-1基因的肺炎克雷伯菌 预览 被引量:1
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作者 朱水荣 商小春 +3 位作者 帅慧群 潘军航 玲玲 张政 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期30-34,共5页
目的对浙江省不同地区上送的临床分离株进行NDM-1基因筛检,初探浙江省NDM-1基因携带菌阳性菌存在现状。方法应用TaqMan-MGB荧光定量PCR方法对2013年度收集的所有临床株进行NDM-1基因筛检;利用普通PCR方法对阳性株进行NDM-1基因测序、MLS... 目的对浙江省不同地区上送的临床分离株进行NDM-1基因筛检,初探浙江省NDM-1基因携带菌阳性菌存在现状。方法应用TaqMan-MGB荧光定量PCR方法对2013年度收集的所有临床株进行NDM-1基因筛检;利用普通PCR方法对阳性株进行NDM-1基因测序、MLST分型及其它30种耐药基因检测;使用VITEK 2Compact高级专家系统对阳性株进行微生物鉴定与耐药表型MIC测试;采用改良Hodge实验及亚胺培南-EDTA双纸片法协同试验,分别对阳性株进行碳青霉烯酶及金属β-内酰胺酶检测。结果经对1 450株菌株进行筛检,仅从1株来自疑似病毒腹泻11月大幼儿患者粪便中分离的肺炎克雷伯菌中检出该基因,基因序列同源性为100%,该菌MLST序列型为ST1416,产碳青霉烯酶及金属β-内酰胺酶,对Levofloxacin、Trimethoprim/Sulfa敏感,对Ciprofloxacin中敏,但对其他18种所检药物均显示耐药,另携带SHV、CTX、DHA、TEM、CMY2、IMP、GES、GIM、OXA-48、SPM、AmpC、aadA1、aacA4、aphA1共14种耐药基因,结果表明该菌株的耐药表型与基因型较为符合。结论本次从肠杆菌科肺炎克雷伯菌中检出NDM-1基因,应为浙江省首次报道,鉴于肠杆菌科细菌耐药速率传播更快,警示相关部门应重视并加强对NDM-1基因携带菌的监测与筛查。 展开更多
关键词 肺炎克雷伯菌 肠杆菌科 NDM-1基因 耐药基因
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多位点分型技术应用于浙江省脑膜炎奈瑟菌基因分型研究 被引量:2
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作者 朱水荣 潘军航 +3 位作者 姚苹苹 姜理平 张政 玲玲 《中国疫苗和免疫》 CAS 北大核心 2015年第3期307-313,共7页
目的对浙江省2004~2013年分离的54株脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis,Nm)进行基因分型研究,了解菌株间的遗传进化关系。方法参照细菌分子分型和基因组差异公共数据库(Pubmlst)提供的引物与方法,获得多位点序列分型(Multilocus... 目的对浙江省2004~2013年分离的54株脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis,Nm)进行基因分型研究,了解菌株间的遗传进化关系。方法参照细菌分子分型和基因组差异公共数据库(Pubmlst)提供的引物与方法,获得多位点序列分型(Multilocus Sequence Typing,MLST)序列型(Sequence Type,ST)。采用进化分析软件(Splitstree)4、聚类分析软件(e BURST)V3等处理所得序列数据,并构建遗传进化图谱。结果 54株Nm得到21个STs,其中11个STs为新发现,主要序列型ST-7和ST-4821分别占29.63%和27.78%。不同血清群其STs/ST-克隆群(Complex)有明显不同,A群菌株78.95%(15/19)为ST-7/ST-5Complex(15/19);B群菌株STs分散,57.14%(8/14)呈单体存在;C群菌株82.35%(14/17)为ST-4821/ST-4821Complex。不同来源分离株其ST-Complex不同,来自病人及密切接触者分离株ST-5Complex分别占48.15%(13/27)及33.33%(4/12)、ST-4821Complex分别占40.74%(11/27)及25.00%(3/12),而来自健康带菌者分离株ST-4821Complex克隆群占40.00%(6/15)。7个管家基因的核苷酸多态性(Pi)范围为0.01298(adk)~0.11100(aro E)。Splitstree 4构建径向系统进化树显示,浙江省Nm菌株分属5个分枝,主要序列型ST-7及ST-4821分别分布于3分枝及2分枝中,4分枝中均为浙江省STs。e BURST V3聚类分析发现,浙江省STs/ST-5Complex基因型相对稳定,但浙江省STs/ST-4821Complex基因型已具遗传多样性变化。结论浙江省Nm以A群78.95%(15/19)ST-7/ST-5Complex和C群82.35%(14/17)ST-4821/ST-4821Complex两大克隆群占绝对优势,B群57.14%(8/14)呈单体分散。浙江省A、B、C群均存在ST-4821Complex相同基因型菌株,可能不同血清群之间已产生荚膜转换,其种群间已显示基因重组进化特征,这是中国首次从A群Nm中检出ST-4821/ST-4821Complex及ST-5798/ST-4821Complex菌株。 展开更多
关键词 脑膜炎奈瑟菌 多位点序列分型 基因分型 遗传进化
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