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大理州健康人群乙型肝炎表面抗体水平分析 预览
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作者 何左 徐然 +1 位作者 鸿 尤凤凤 《西藏医药》 2019年第3期84-86,共3页
目的了解2016~2018年大理州人群乙型肝炎(乙肝)表面抗体水平(HBsAb),为乙肝防控提供科学依据。方法采集11454份居民血清样本(12个行政区),通过酶联免疫吸附试验(ELISA)法分析HBsA水平情况。结果(1)6231份血清样本检验为阳性(男性2767人... 目的了解2016~2018年大理州人群乙型肝炎(乙肝)表面抗体水平(HBsAb),为乙肝防控提供科学依据。方法采集11454份居民血清样本(12个行政区),通过酶联免疫吸附试验(ELISA)法分析HBsA水平情况。结果(1)6231份血清样本检验为阳性(男性2767人,女性3464人),阳性率为31.31%~92.50%,其中:城市达到54.07%,农村达到54.41%(2)HBsAb水平在8至17月齡人群中最高(92.50%),在25至34周岁人群中最低(31.31%)。(3)HBsAb水平与年龄呈负相关(rs=-0.397,P<0.001),与免疫史呈正相关,差异均有统计学意义(P<0.001)。结论本地区居民HBsAb水平较低,应积极推广成人乙肝疫苗接种,以防控乙型肝炎病毒的传播。 展开更多
关键词 乙型肝炎 表面抗体 防控
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轮状病毒NSP5真核表达载体的构建、鉴定及功能研究 预览
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作者 陈林林 周艳 +4 位作者 林晓晨 杜静 刘洋 汪艺 鸿 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期12-16,共5页
研究轮状病毒(Rotavirus,RV)非结构蛋白5(NSP5)在体外对RV复制的作用。以质粒pEGFP-N2为载体构建出可特异性表达重组蛋白NSP5的真核表达载体后,将重组质粒转染MA104细胞并分别通过免疫荧光和Western Blot检测NSP5在转染后不同时间的表... 研究轮状病毒(Rotavirus,RV)非结构蛋白5(NSP5)在体外对RV复制的作用。以质粒pEGFP-N2为载体构建出可特异性表达重组蛋白NSP5的真核表达载体后,将重组质粒转染MA104细胞并分别通过免疫荧光和Western Blot检测NSP5在转染后不同时间的表达差异。随后,重组质粒转染组及对照组细胞分别接种相同剂量的RV,一定时间后根据GFP分布来确认重组蛋白NSP5在细胞内的迁移变化情况,并比较实验组和对照组之间的RV复制能力差异。结果发现,NSP5蛋白在重组质粒转染细胞48 h后表达达到顶峰。此外,GFP也显示NSP5蛋白随RV的感染从弥散状转变为点状聚集,且转染该重组质粒的细胞内RV复制水平明显高于对照细胞。说明了轮状病毒NSP5对病毒的复制具有明显促进作用,这也为深入了解RV的感染、复制及致病机理提供理论基础。 展开更多
关键词 轮状病毒 NSP5 真核表达载体 病毒复制
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2016-2018年大理州乙型肝炎表面抗体抽样调查分析 预览
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作者 何左 徐然 +1 位作者 鸿 尤凤凤 《西南军医》 2019年第5期463-466,共4页
目的了解大理州人群乙型肝炎(乙肝)表面抗体水平(HBsAb),评价人群免疫状况,为乙肝防控提供科学依据。方法采用分层整群抽样,采集8个年龄组的11454份血清,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)法进行HBsAb检测。结果11454名调查对象中HBsAb阳性6... 目的了解大理州人群乙型肝炎(乙肝)表面抗体水平(HBsAb),评价人群免疫状况,为乙肝防控提供科学依据。方法采用分层整群抽样,采集8个年龄组的11454份血清,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)法进行HBsAb检测。结果11454名调查对象中HBsAb阳性6231人,阳性率为54.40%,95%CI:53.49%~55.31%。不同地区之间抗体阳性率,差异有统计学意义(χ^2=215.702,P<0.001);各年龄组间的HBsAb阳性率波动较大,从8~17月龄的92.50%降至7~14岁的37.63%,阳性率随着年龄的增加而降低(χ^2趋势=1781.641,P<0.001),两者呈负相关(rs=-0.397,P<0.001);HBsAb阳性率与免疫史、及时接种和最后1剂接种后间隔时间有关,差异均有统计学意义(P<0.001)。结论大理州人群HBsAb阳性率较低,人群中未形成有效屏障,在加强基础免疫的同时,适时开展强化免疫和积极推广成人乙肝疫苗接种,以提高人群免疫水平。 展开更多
关键词 乙型肝炎 表面抗体 抽样调查
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李鸿钧的诗
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作者 鸿 《辽河》 2019年第5期58-59,共2页
定子调压装置在320 t天车上的应用 预览
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作者 鸿 《山西冶金》 CAS 2019年第4期148-149,174共3页
天车是炼钢厂钢铁料液体金属转运的重要设备,定子调压装置是天车控制系统的核心装置。本文主要介绍天车运行环境和运行形式,以及定子调压装置的工作条件、工作特点、工作原理、工作过程和常见故障分析。该装置使用效果良好,能够很好地... 天车是炼钢厂钢铁料液体金属转运的重要设备,定子调压装置是天车控制系统的核心装置。本文主要介绍天车运行环境和运行形式,以及定子调压装置的工作条件、工作特点、工作原理、工作过程和常见故障分析。该装置使用效果良好,能够很好地实现平滑调速,满足炼钢液态金属运转需求。 展开更多
关键词 炼钢 定子调压 可控硅
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大理州2016年脊髓灰质炎野病毒输入与传播风险评估
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作者 何左 杨晓炜 +3 位作者 鸿 易寿生 赵桂芬 赵清杉 《中国公共卫生管理》 2018年第5期698-700,704共4页
目的对大理州脊髓灰质炎野病毒输入与传播风险进行评估,识别风险薄弱地区和环节,为科学制定防控措施,阻止脊灰疫情输入与传播提供参考依据。方法在《云南省2016年脊髓灰质炎野病毒输入与传播风险评估方案》的基础上,通过专家会商法及查... 目的对大理州脊髓灰质炎野病毒输入与传播风险进行评估,识别风险薄弱地区和环节,为科学制定防控措施,阻止脊灰疫情输入与传播提供参考依据。方法在《云南省2016年脊髓灰质炎野病毒输入与传播风险评估方案》的基础上,通过专家会商法及查阅文献后改良部分评估指标,根据收集整理的资料,对人群免疫情况、AFP病例监测和境外输入风险进行评分,再乘以相应的权重系数,累加得到各县市的综合评分,依据综合评分以四分位数法判定风险等级。结果南涧县、大理市和巍山县为高风险;云龙等6个县为中风险;漾濞等3个县为低风险。结论各县市尤其是高风险地区,应根据薄弱环节采取针对性措施,加强常规免疫工作,提高人群免疫水平;加强AFP病例监测敏感性和质量;适时开展应急演练、提升疫情应对能力;加强宣传教育工作,巩固无脊灰状态。 展开更多
关键词 脊髓灰质炎 野病毒 输入 传播 风险评估
2017年深圳地区冬季诺如病毒基因分型与流行病学分析
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作者 陈林林 周艳 +4 位作者 林晓晨 杜静 刘洋 汪艺 鸿 《中华微生物学和免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第10期725-730,共6页
目的对深圳地区2017年冬季诺如病毒(Norovirus,NoV)流行株基因型、流行病学特点及同源性进行分析和研究。方法通过提取313份粪便样品的核酸后利用NoV特异性引物进行逆转录PCR(RT.PCR),将阳性PCR产物测序。根据样品测序序列及NoV... 目的对深圳地区2017年冬季诺如病毒(Norovirus,NoV)流行株基因型、流行病学特点及同源性进行分析和研究。方法通过提取313份粪便样品的核酸后利用NoV特异性引物进行逆转录PCR(RT.PCR),将阳性PCR产物测序。根据样品测序序列及NoV参考株序列,利用软件Mega4.1及ClustMW构建系统发生树。结果NoV阳性样品共26份且均为GⅡ.4型,分别与GⅡ.4(KY407156)、GⅡ.4(KY580757)及GⅡ.4(KX372682)具有较高的同源性。此外,88.46%的NoV样品与本地区历年流行株同源性较低,且46.15%与我国其他地区流行株存在差异。结论2017年冬季深圳地区诺如病毒流行株以GⅡ.4型为主,且其在流行性及同源性上具有自身的特点.在当地公共卫生工作中需加强关注。 展开更多
关键词 诺如病毒 基因型 系统发生树 同源性分析
轮状病毒NSP5结构与功能的研究进展 预览 被引量:1
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作者 刘洋 林晓晨 鸿 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期72-74,共3页
轮状病毒(RV)是世界范围内导致婴幼儿胃肠道疾病的主要病原体,RV基因组由11个分节段的双链RNA组成,分别编码6个结构蛋白(VP1、VP2、VP3、VP4、VP6和VP7)和6个非结构蛋白(NSP1、NSP2、NSP3、NSP4、NSP5和NSP6),其中第11基因片... 轮状病毒(RV)是世界范围内导致婴幼儿胃肠道疾病的主要病原体,RV基因组由11个分节段的双链RNA组成,分别编码6个结构蛋白(VP1、VP2、VP3、VP4、VP6和VP7)和6个非结构蛋白(NSP1、NSP2、NSP3、NSP4、NSP5和NSP6),其中第11基因片段编码非结构蛋白NSP5。NSP5蛋白较大,NSP5在病毒感染细胞中以二聚体形式存在,是一个高度磷酸化的蛋白,可与轮状病毒其他非结构蛋白或结构蛋白相互作用,具有RNA结合活性,在病毒复制过程中主要通过与 NSP2的一系列相互作用发挥功能。对轮状病毒的相关结构与功能的研究十分必要,近年来,对轮状病毒的非结构蛋白进行了大量研究,主要集中在其结构、表达、功能及免疫学性质方面,现就目前国内外对轮状病毒NSP5结构与功能的研究进展进行综述。 展开更多
关键词 轮状病毒 结构蛋白 非结构蛋白 NSP5
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猴源轮状病毒SA11株Balb/c乳鼠动物模型的建立 预览
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作者 乔洪图 周艳 +5 位作者 尹娜 陈林林 刘洋 苏婷 孙茂盛 鸿 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期22-26,共5页
建立轮状病毒(rotavirus,RV)SA-11株Balb/c乳鼠动物模型,研究其发病机制,为后续疫苗保护性评价奠定基础。用不同剂量的SA11毒株单次灌胃感染7d龄的Balb/c乳鼠,于感染后不同时间点观察其腹泻、活动能力及精神状态等生理指标,并解剖乳鼠,... 建立轮状病毒(rotavirus,RV)SA-11株Balb/c乳鼠动物模型,研究其发病机制,为后续疫苗保护性评价奠定基础。用不同剂量的SA11毒株单次灌胃感染7d龄的Balb/c乳鼠,于感染后不同时间点观察其腹泻、活动能力及精神状态等生理指标,并解剖乳鼠,取其心、肝、脾、肺、小肠及肾等组织。免疫组化和免疫荧光检测轮状病毒抗原分布,HE染色观察小肠形态学改变,组织细胞原位凋亡检测观察攻毒后小肠绒毛细胞的凋亡情况。研究发现,高剂量和中剂量攻毒组在攻毒24h后全组乳鼠即可发生明显腹泻,对照组和低剂量组乳鼠无腹泻发生。攻毒72h后解剖乳鼠,高、中剂量攻毒组的乳鼠肠道可见明显充血及肠胀气,病理切片HE染色显示小肠绒毛发生大量空泡变性及小肠绒毛顶端破损,小肠绒毛原位凋亡检测可见其顶端细胞发生大量凋亡,免疫荧光检测发现在乳鼠的小肠绒毛顶端及肾脏的肾小球位置均有RV抗原分布。成功构建了猴源轮状病毒SA11株Balb/c乳鼠动物模型,研究发现轮状病毒除感染乳鼠小肠绒毛导致其病变破损发生腹泻外,还可感染肾脏等肠道外器官,引起肠道外感染。 展开更多
关键词 轮状病毒 动物模型 Balb/c乳鼠 发病机制
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大理白族自治州2016年上半年麻疹疫情风险评估 预览
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作者 何左 杨晓炜 鸿 《中华灾害救援医学》 2018年第12期661-664,共4页
目的 对大理白族自治州麻疹疫情进行风险评估,识别风险薄弱地区和环节,提出针对性措施,防范麻疹疫情暴发和流行. 方法 依据《云南省2016年上半年麻疹疫情风险评估方案》,对免疫水平、麻疹监测质量、疫情易于发生扩散、院内感染... 目的 对大理白族自治州麻疹疫情进行风险评估,识别风险薄弱地区和环节,提出针对性措施,防范麻疹疫情暴发和流行. 方法 依据《云南省2016年上半年麻疹疫情风险评估方案》,对免疫水平、麻疹监测质量、疫情易于发生扩散、院内感染风险、边境输入风险及实际工作自评等指标进行风险评估,并根据风险评估综合得分以四分位数法判定风险等级. 结果 大理白族自治州免疫水平薄弱的是大理市(20.75分)、弥渡县(9.50分)和祥云县(7.50分);麻疹监测质量不高的是弥渡县和南涧县(均为3.50分);疫情易于扩散的是大理市(15.00分);院内感染风险高的是大理市(5.50分),实际工作自评得分最高的是大理市、云龙县、洱源县和鹤庆县(均为7.00分);总体麻疹疫情风险较高的是大理市(49.75分)、弥渡县(22.00分)和祥云县(21.00分),其余县市为中风险和低风险地区. 结论 各县市应根据不同的风险级别,查找薄弱环节.大理市、弥渡县和祥云县应采取措施提高人群免疫水平,弥渡县和南涧县应加强麻疹病例监测,大理市应严格控制院内感染,大理市、弥渡县和祥云县应重点开展风险评估和补充免疫等有效措施,降低麻疹感染及传播风险. 展开更多
关键词 麻疹 疫情 风险评估 四分位数法
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基于加速度信号的悬置螺栓疲劳寿命研究
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作者 鸿 郑松林 冯金芝 《机械强度》 CSCD 北大核心 2018年第1期189-194,共6页
零件在实验工况下所受应力数据对预测其疲劳寿命至关重要。针对发动机悬置螺栓等无法通过应变片传感器直接得到载荷数据的部位,提出一种基于加速度信号的悬置螺栓疲劳寿命估计方法。通过宏观断口及力学模型分析,明确了在不同工况下造成... 零件在实验工况下所受应力数据对预测其疲劳寿命至关重要。针对发动机悬置螺栓等无法通过应变片传感器直接得到载荷数据的部位,提出一种基于加速度信号的悬置螺栓疲劳寿命估计方法。通过宏观断口及力学模型分析,明确了在不同工况下造成悬置螺栓疲劳失效的主要矢量载荷与加速度载荷的转换关系。结合悬置螺栓S-N曲线,计算出不同工况下由加速度引起的弯矩和拉压波动载荷的时间历程,并进行了发动机悬置螺栓的疲劳损伤计算,从而形成了一种复杂载荷下的发动机悬置螺栓疲劳寿命分析方法。最后基于悬置螺栓在两种道路的应力载荷谱所分别对应的疲劳寿命,建立起了针对悬置螺栓的道路间的当量关系。 展开更多
关键词 悬置螺栓 加速度信号 载荷谱 疲劳寿命 当量关系
2013—2015年大理州人群麻疹抗体水平监测 被引量:1
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作者 何左 鸿 +3 位作者 易寿生 赵桂芬 赵青杉 陈冉 《疾病监测》 CAS 2017年第10期832-835,共4页
目的 了解大理州人群麻疹抗体水平,为消除麻疹提供科学决策依据。方法 采用分层整群抽样,于2013—2015年采集14 119人血清,应用ELISA法测定血清中麻疹Ig G抗体。结果 麻疹抗体阳性率为94.51%,保护率为61.87%,抗体几何平均浓度(GMC)为1... 目的 了解大理州人群麻疹抗体水平,为消除麻疹提供科学决策依据。方法 采用分层整群抽样,于2013—2015年采集14 119人血清,应用ELISA法测定血清中麻疹Ig G抗体。结果 麻疹抗体阳性率为94.51%,保护率为61.87%,抗体几何平均浓度(GMC)为1 143.78 mIU/ml,不同地区GMC差异有统计学意义(P=0.001);各年龄组的GMC差异有统计学意义(P=0.001),以18~23月龄组最高,2~3岁组次之,含麻疹成分疫苗(MCV)接种率与抗体阳性率、保护率均呈正相关(P〈0.05);接种MCV 2剂次的人群,GMC可达到1 242.31 mIU/ml,与接种1剂次相比,差异有统计学意义(P=0.001)。结论 大理州基本形成预防麻疹的免疫屏障,发生暴发或流行的可能性较小,但麻疹抗体保护率偏低,且存在一定的地区差异;加强麻疹抗体水平监测,及时发现免疫薄弱地区和空白人群是消除麻疹的关键。 展开更多
关键词 麻疹 抗体水平 监测
恒河猴miR-125a-3p慢病毒载体的构建、鉴定以及功能研究 预览
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作者 刘雅琳 周艳 +4 位作者 耿盼盼 解裕萍 乔洪图 孙茂盛 鸿 《生物学杂志》 CAS CSCD 2017年第3期1-5,共5页
构建携带miR-125a-3p过表达与抑制表达shRNA的慢病毒,研究miR-125a-3p对轮状病毒感染乳鼠导致的腹泻的影响,为进一步研究miR-125a-3p对轮状病毒增殖过程中的影响及探究其机制提供前期研究基础。设计miR-125a-3p前体序列及其反向互补序列... 构建携带miR-125a-3p过表达与抑制表达shRNA的慢病毒,研究miR-125a-3p对轮状病毒感染乳鼠导致的腹泻的影响,为进一步研究miR-125a-3p对轮状病毒增殖过程中的影响及探究其机制提供前期研究基础。设计miR-125a-3p前体序列及其反向互补序列,与慢病毒骨架质p LVshRNA-EGFP(2A)Puro载体进行酶切连接,构建过表达与抑制表达miR-125a-3p的慢病毒表达载体。利用HEK293Ta细胞包装慢病毒颗粒,测定病毒滴度后,将获得的miR-125a-3p过表达慢病毒颗粒感染MA104细胞和灌胃感染乳鼠,检测miR-125a-3p的表达。同时对乳鼠进行轮状病毒攻毒试验,观察腹泻情况。研究成功构建了过表达及抑制miR-125a-3p表达的慢病毒载体,获得高效的过表达及抑制miR-125a-3p的慢病毒颗粒,成功感染MA104细胞,以及在乳鼠小肠组织有表达。同时发现miR-125a-3p过表达慢病毒感染乳鼠后对轮状病毒引起的腹泻有明显的抑制作用。 展开更多
关键词 miR-125a-3p 慢病毒 过表达载体 抑制表达载体 乳鼠
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性激素对宣威XWLC-05肺腺癌细胞PTHrP表达影响的研究 预览
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作者 龚丽明 黄云超 +1 位作者 鸿 王东坤 《云南医药》 CAS 2017年第1期1-5,共5页
目的 探讨宣威XWLC-05肺腺癌细胞中PTHrP的表达,以及雌雄激素对其表达的影响,为女性肺癌患者PTHrP的表达较男性患者PTHrP的表达高提供细胞学方面的依据,并为下一步研究PTHrP的表达与雌性肺癌裸鼠生存优势间关系而做的动物实验建模做准... 目的 探讨宣威XWLC-05肺腺癌细胞中PTHrP的表达,以及雌雄激素对其表达的影响,为女性肺癌患者PTHrP的表达较男性患者PTHrP的表达高提供细胞学方面的依据,并为下一步研究PTHrP的表达与雌性肺癌裸鼠生存优势间关系而做的动物实验建模做准备。方法 采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)和Western Blot,检测XWLC-05细胞中雌激素受体(ER-α,ER-β),雄激素受体(AR)和甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)的表达;分别用不同浓度的雌二醇和睾酮处理XWLC-05细胞48h,用实时定量PCR(Real-time quantitative PCR)检测激素干预前后XWLC-05细胞中PTHrPmRNA的表达。结果 XWLC-05细胞中ER-β,AR表达,ER-α不表达,PTHrPmRNA表达;雌二醇对细胞PTHrPm RNA表达无影响,睾酮明显降低了PTHrPmRNA的表达。结论 XWLC-05细胞中ER-β,AR表达,PTHrP表达;性激素可调节PTHrP的分泌,雄激素对PTHrP的表达起负调节作用。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 XWLC-05肺腺癌细胞 甲状旁腺激素相关蛋白PTHrP 性激素 实时定量PCR
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大理州8月龄至5岁儿童乙肝疫苗接种率及免疫效果 被引量:2
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作者 何左 易寿生 +3 位作者 鸿 赵桂芬 丁丽琨 陈冉 《海峡预防医学杂志》 CAS 2017年第6期45-47,共3页
目的了解大理州儿童乙肝疫苗接种率及免疫效果,为制定防控策略提供依据。方法 2013—2015年,用分层整群抽样法,抽取8月龄至5岁儿童为调查对象,调查乙肝疫苗接种率及免疫效果,用ELISA法检测乙肝表面抗体(HBsAb)。结果 3年共调查儿童6 ... 目的了解大理州儿童乙肝疫苗接种率及免疫效果,为制定防控策略提供依据。方法 2013—2015年,用分层整群抽样法,抽取8月龄至5岁儿童为调查对象,调查乙肝疫苗接种率及免疫效果,用ELISA法检测乙肝表面抗体(HBsAb)。结果 3年共调查儿童6 668人,乙肝疫苗接种率99.7%,首针及时接种率89.7%(其中住院分娩儿童首针及时接种率90.7%,在家分娩儿童首针及时接种率仅50.0%),乙肝疫苗全程接种率98.6%。随年龄增长HBsAb阳性率呈下降趋势,8~17月龄组阳性率92.0%,4~5岁组降至49.0%;HBsAb阳性率随免疫次数增加呈升高趋势(0剂次阳性率33.3%、接种3剂次达73.9%)。结论大理州8月龄至5岁儿童乙肝疫苗全程接种率较高,但首针及时接种率不够理想,HBsAb阳性率随年龄增长而降低,建议≥4岁儿童条件许可时可加强免疫。 展开更多
关键词 乙肝疫苗 儿童 接种率 免疫效果
Adipsin腺病毒载体构建及对2型糖尿病大鼠的治疗作用 预览 被引量:2
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作者 张磊 周艳 +4 位作者 闫姗姗 解裕萍 耿盼盼 孙茂盛 鸿 《生物学杂志》 CAS CSCD 2016年第5期58-62,共5页
脂肪因子adipsin是由脂肪细胞分泌的一类细胞信号蛋白,其在刺激胰岛素分泌、控制血糖中具有重要的调控作用。以重组腺病毒系统作为载体,将adipsin转移至Zucker Diabetic Fatty(ZDF)2型糖尿病大鼠体内,对大鼠进行基因治疗探索,为进一... 脂肪因子adipsin是由脂肪细胞分泌的一类细胞信号蛋白,其在刺激胰岛素分泌、控制血糖中具有重要的调控作用。以重组腺病毒系统作为载体,将adipsin转移至Zucker Diabetic Fatty(ZDF)2型糖尿病大鼠体内,对大鼠进行基因治疗探索,为进一步研究脂肪因子adipsin与代谢性疾病如2型糖尿病等之间相互作用机制提供了前期的基础。首先,通过构建携带adipsin的重组腺病毒质粒pAdEasy-CMV-adipsin,并在HEK293细胞中成功包装出重组腺病毒Ad-adipsin;其次,通过PCR和Western blotting检测ADIPSIN蛋白在HEK293细胞中的表达;最后,测定重组腺病毒Ad-adipsin滴度,并通过尾静脉注射的方式,将重组腺病毒Ad-adipsin导入2型糖尿病模型大鼠体内,评价脂肪因子adipsin的基因治疗作用。研究结果显示,2型糖尿病模型大鼠ZDF(fa/fa)的空腹血糖值(FPG)、空腹胰岛素值(FINS)、血清总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、低密度脂蛋白(LDL-c)等与注射重组腺病毒Ad-lacZ的对照组相比有显著下降(P〈0.05),并且胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)显著降低(P〈0.05),以上结果表明,重组腺病毒Ad-adipsin可以有效改善2型糖尿病模型ZDF大鼠的糖、脂质代谢紊乱,对大鼠2型糖尿病发生发展具有一定的保护效果。 展开更多
关键词 adipsin ZDF大鼠 2型糖尿病
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靶向MA104细胞多聚嘧啶序列结合蛋白shRNA慢病毒干扰质粒的构建及鉴定
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作者 周艳 解裕萍 +3 位作者 吴晋元 闫姗姗 张磊 鸿 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2016年第1期7-12,共6页
目的构建靶向MA104细胞多聚嘧啶序列结合蛋白(polypyrimidine tract-binding protein,PTB)的shRNA慢病毒干扰质粒,并对其进行鉴定。方法根据Gen Bank中登录的PTB的基因序列设计并合成2条靶向MA104细胞PTB基因的shRNA干扰序列(shPTB1... 目的构建靶向MA104细胞多聚嘧啶序列结合蛋白(polypyrimidine tract-binding protein,PTB)的shRNA慢病毒干扰质粒,并对其进行鉴定。方法根据Gen Bank中登录的PTB的基因序列设计并合成2条靶向MA104细胞PTB基因的shRNA干扰序列(shPTB1、shPTB2)和1条阴性对照序列(shControl),分别插入载体p LVshRNA-EGFP(2A)Puro后,构建慢病毒重组质粒;利用HEK293Ta细胞包装针对PTB基因的shRNA的重组慢病毒颗粒;感染MA104细胞后,经Resl-time PCR、免疫荧光和Western blot法分别检测MA104细胞中PTB基因的转录和蛋白表达水平。结果 PCR及测序鉴定证明3种重组慢病毒质粒构建正确。3种重组慢病毒质粒转染HEK293Ta细胞48 h后,均可见绿色荧光表达,3组细胞的病毒滴度均为2×106 TU/ml。3种重组慢病毒感染MA104细胞48 h后均可见绿色荧光表达。经嘌呤霉素加压筛选后,p LVshPTB1-EGFP-2A和p LVshPTB2-EGFP-2A组MA104细胞仅有少量细胞于细胞核中表达,p LVshPTB1-EGFP-2A组MA104细胞中PTB基因转录及蛋白表达的水平均低于p LVshPTB2-EGFP-2A组。结论成功构建了靶向MA104细胞PTB蛋白的shRNA重组慢病毒,shRNA序列可成功下调PTB在MA104细胞中的表达,为PTB在RV增殖过程中调控作用的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 MA104细胞 多聚嘧啶序列结合蛋白 慢病毒质粒 RNA干扰
小鼠resistin基因慢病毒表达载体构建及在KMB17细胞中的表达 被引量:1
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作者 陈瑜 赵远 +7 位作者 岳俊 鸿 和占龙 马开利 马进 吴正存 唐东红 鲁帅尧 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期119-125,135共8页
[目的]构建携带小鼠resistin基因的慢病毒表达载体,并高效转导靶细胞。[方法]从小鼠脂肪组织提取总RNA,经PCR扩增、酶切、连接、转化后构建重组质粒;通过293T细胞包装为重组慢病毒颗粒,然后感染KMB17细胞,检测小鼠resistin基因在靶细胞... [目的]构建携带小鼠resistin基因的慢病毒表达载体,并高效转导靶细胞。[方法]从小鼠脂肪组织提取总RNA,经PCR扩增、酶切、连接、转化后构建重组质粒;通过293T细胞包装为重组慢病毒颗粒,然后感染KMB17细胞,检测小鼠resistin基因在靶细胞中的表达。[结果]PCR扩增到预期的342 bp大小的resistin基因目的片段;构建的重组质粒经酶切得到了342 bp大小的目的片段,测序鉴定为小鼠resistin基因序列;重组慢病毒包装可观察到很强的绿色荧光,说明具有较高的质粒转染效率;重组慢病毒感染KMB17后可检测到小鼠resistin基因转录水平和蛋白水平的表达,证明resistin基因得到有效转导并可在靶细胞中高水平表达。[结论]成功构建了携带小鼠resistin基因的慢病毒表达载体并可在KMB17靶细胞中获得高效表达。 展开更多
关键词 RESISTIN 慢病毒载体 靶细胞 表达 小鼠
树鼩IgG纯化鉴定及其多克隆抗体制备和检测
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作者 吴晋元 周艳 +4 位作者 解裕萍 唐东红 叶尤松 鸿 孙茂盛 《现代生物医学进展》 CAS 2016年第7期1201-1204,共4页
目的:比较两种抗体纯化方法在分离纯化树鼩IgG抗体的应用,制备抗IgG的多克隆抗体及检测。方法:采用两种商品化IgG抗体纯化试剂盒分离树鼩血清IgG抗体,采用SDS-PAGE和蛋白定量测定提纯IgG。以树鼩IgG作为抗原,与等量弗氏完全佐剂(第... 目的:比较两种抗体纯化方法在分离纯化树鼩IgG抗体的应用,制备抗IgG的多克隆抗体及检测。方法:采用两种商品化IgG抗体纯化试剂盒分离树鼩血清IgG抗体,采用SDS-PAGE和蛋白定量测定提纯IgG。以树鼩IgG作为抗原,与等量弗氏完全佐剂(第一次)、弗氏不完全佐剂(第二次)混合皮下注射免疫兔,对分离血清进行多克隆抗体纯化及Western Blot检测及定量分析。结果:两种方法均能有效分离纯化树鼩IgG,在经过Montage PROSEP-A试剂纯化后的IgG在纯度和含量方面均优于Protein A/G Matrix试剂。通过纯化后的树鼩IgG免疫兔制备的抗IgG抗体能有效识别树鼩IgG。结论:纯化的树鼩IgG具有良好免疫原性,由此制备的抗体具有高度特异性。研究结果为利用树鼩作为实验动物提供了必要的实验基础。 展开更多
关键词 树鼩 免疫球蛋白 纯化 多克隆抗体 免疫印记
下调人脐带间充质干细胞Mbd3基因shRNA慢病毒的构建及鉴定 预览
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作者 闫姗姗 周艳 +4 位作者 张磊 孙茂盛 解裕萍 鸿 《生物学杂志》 CAS CSCD 2015年第3期15-20,共6页
研究构建靶向抑制人Mbd3表达的shRNA慢病毒颗粒,感染人脐带间充质干细胞并用嘌呤霉素筛选获得Mbd3稳定下调的细胞系,为进一步探讨Mbd3在诱导型多潜能干细胞形成中的作用提供实验基础。研究根据Gene Bank中公布的Mbd3基因序列设计特异... 研究构建靶向抑制人Mbd3表达的shRNA慢病毒颗粒,感染人脐带间充质干细胞并用嘌呤霉素筛选获得Mbd3稳定下调的细胞系,为进一步探讨Mbd3在诱导型多潜能干细胞形成中的作用提供实验基础。研究根据Gene Bank中公布的Mbd3基因序列设计特异性siRNA干扰序列并合成可产生shRNA的双链DNA,经双酶切后克隆至pLVshRNA-EGFP(2A)Puro载体上构建慢病毒重组质粒,转化DH5α大肠杆菌PCR检测筛选阳性质粒,利用HEK293Ta包装产生含有Mbd3shRNA的慢病毒颗粒。通过RT-PCR和Western blot检测慢病毒感染人脐带间充质干细胞(hUC-MSC)后Mbd3的转录和蛋白表达情况,进一步检测重组慢病毒对Mbd3的沉默效果并筛选出最佳抑制效果的shRNA慢病毒载体。结果显示成功构建并筛选出下调Mbd3的最佳慢病毒干扰载体,慢病毒感染人脐带间充质干细胞48h后于荧光显微镜下可见绿色荧光,经嘌呤霉素筛选9 d后,RT-PCR检测Mbd3表达显著降低, Western blot检测Mbd3蛋白表达明显减少。说明构建的shRNA重组慢病毒包装成功,具有较高的感染活性,可有效抑制人脐带间充质干细胞Mbd3的表达,为后续研究脐带间充质干细胞跨胚层分化打下前期研究基础。 展开更多
关键词 Mbd3基因 基因沉默 慢病毒载体 RNA干扰
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