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肺炎链球菌免疫小鼠程序的优化及杂交瘤细胞株的建立
1
作者 吴元元 沈荣 +4 位作者 李雄雄 周晖国 徐世友 张生琰 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2019年第8期915-918,922共5页
目的优化肺炎链球菌CSR SCS2 clone1小鼠的免疫程序,同时建立肺炎链球菌C多糖(C polysaccharides,CPs)杂交瘤细胞株。方法制备免疫抗原CSR SCS2 clonel,进行小鼠免疫程序优化:抗原量[(0. 5~2)×10~8个、(1~4)×108个、(2. 4~10)... 目的优化肺炎链球菌CSR SCS2 clone1小鼠的免疫程序,同时建立肺炎链球菌C多糖(C polysaccharides,CPs)杂交瘤细胞株。方法制备免疫抗原CSR SCS2 clonel,进行小鼠免疫程序优化:抗原量[(0. 5~2)×10~8个、(1~4)×108个、(2. 4~10)×10~8个)]、免疫间隔时间(3 d、1周、2周)、免疫途径(腹腔、腹股沟及尾静脉),同时确定抗原是否添加佐剂,间接ELISA法检测小鼠血清抗体水平。采用优化程序免疫小鼠,取血清效价最高的小鼠脾细胞,经传统单克隆抗体制备技术建立肺炎链球菌C-Ps杂交瘤细胞株,并检测细胞株的染色体数目及其分泌抗体的稳定性及特异性。结果确定小鼠最适免疫程序为:抗原量为(1~4)×108个,且需添加弗氏佐剂,免疫间隔时间为1周,免疫途径为腹股沟注射。最适程序免疫小鼠血清抗体效价达1∶12 000以上。建立了3株肺炎链球菌C-Ps杂交瘤细胞,命名为A4、G8、H10株,染色体数目分别为98、102和102,分泌的抗体具有良好的稳定性和特异性。结论成功优化了肺炎链球菌小鼠的免疫程序,并建立了肺炎链球菌C-Ps杂交瘤细胞株,为肺炎链球菌荚膜多糖中C-Ps含量检测方法的建立奠定了基础。 展开更多
关键词 肺炎链球菌 C多糖 免疫程序 杂交瘤细胞
肺炎链球菌C多糖含量检测方法的建立 预览
2
作者 吴元元 李雄雄 +1 位作者 沈荣 《微生物学免疫学进展》 2019年第2期22-28,共7页
目的使用肺炎链球菌C多糖单克隆抗体(单抗),建立检测荚膜多糖中残留的C多糖含量的方法。方法选择BALB/c雌性小鼠,采用体内诱生单抗腹水,放大生产肺炎链球菌C多糖单抗;使用间接ELISA、抑制性ELISA对其进行特异性鉴定;用特异性和亲和力高... 目的使用肺炎链球菌C多糖单克隆抗体(单抗),建立检测荚膜多糖中残留的C多糖含量的方法。方法选择BALB/c雌性小鼠,采用体内诱生单抗腹水,放大生产肺炎链球菌C多糖单抗;使用间接ELISA、抑制性ELISA对其进行特异性鉴定;用特异性和亲和力高的单抗尝试建立肺炎链球菌荚膜多糖中C多糖含量检测的速率比浊法,并对该方法的线性、精密度、特异性进行验证。结果所制4株单抗的抗体类别均为IgM,识别的抗原表位互不相同,亲和力也不同。间接ELISA、抑制性ELISA结果均显示,所获得的单抗能够作用于肺炎链球菌C多糖上的磷酸胆碱位点,具有很好的特异性。选择单抗E8建立速率比浊检测方法的线性、精密度和特异性均良好,检测结果表明肺炎链球菌23个血清型荚膜多糖中C多糖含量不同。结论利用单抗建立了检测肺炎链球菌荚膜多糖中残留的C多糖的含量的速率比浊法。 展开更多
关键词 肺炎链球菌 C多糖 单克隆抗体
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葡萄糖及其代谢产物对犬肾上皮-siat7e细胞生长代谢的影响
3
作者 张生琰 孙燕 +4 位作者 周晖国 吴元元 徐世友 李薇 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2019年第6期644-647,652共5页
目的探讨葡萄糖及其代谢产物对转染siat7e基因的犬肾上皮(Madin-Darby canine kidney,MDCK)细胞(MDCKsiat7e)生长代谢的影响。方法采用含不同起始量(3. 86、6. 46、9. 29、10. 60、12. 80、16. 06 g/L)和维持量(3、5、7 g/L)葡萄糖浓度... 目的探讨葡萄糖及其代谢产物对转染siat7e基因的犬肾上皮(Madin-Darby canine kidney,MDCK)细胞(MDCKsiat7e)生长代谢的影响。方法采用含不同起始量(3. 86、6. 46、9. 29、10. 60、12. 80、16. 06 g/L)和维持量(3、5、7 g/L)葡萄糖浓度的无血清无蛋白培养基cellhappy BD001(简称BD001),分别分批培养MDCK-siat7e细胞,每24 h取样进行活细胞计数及葡萄糖、乳酸、氨含量测定。结果不同起始及维持量葡萄糖浓度的BD001对MDCK-siat7e细胞生长均无明显影响,细胞比生长速率以及乳酸、氨比生成速率和乳酸、氨含量差异均无统计学意义(P> 0. 05)。结论葡萄糖并不是制约MDCK-siat7e细胞生长的重要因素,起始葡萄糖浓度较低时,细胞生长后期可能利用代谢副产物乳酸维持生长,而起始葡萄糖浓度较高时,代谢副产物乳酸则有可能抑制细胞的生长,氨对细胞的生长具有明显的抑制作用。 展开更多
关键词 MDCK-siat7e细胞 葡萄糖 乳酸 生长代谢
伤寒沙门菌中试阶段发酵过程染菌建模预测
4
作者 徐世友 于飞飞 +3 位作者 杨千苇 周晖国 吴元元 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2019年第6期653-656,共4页
目的建立模型预测伤寒沙门菌中试阶段发酵过程染菌情况。方法通过对伤寒沙门菌中试阶段36批次发酵数据进行分析,选取特征和目标变量,利用GBDT(Gradient Boosting Decision Tree,GBDT)+LR(Logistic Regression,LR)混合机器学习算法建立... 目的建立模型预测伤寒沙门菌中试阶段发酵过程染菌情况。方法通过对伤寒沙门菌中试阶段36批次发酵数据进行分析,选取特征和目标变量,利用GBDT(Gradient Boosting Decision Tree,GBDT)+LR(Logistic Regression,LR)混合机器学习算法建立染菌预测模型,并对所建立模型进行预测评估。结果选取特征为:培养基A600值,0、2、3、4 h发酵液A600值,2、3、4 h每升发酵液的累计葡萄糖消耗量,共8个特征;以发酵4 h是否染菌作为目标变量;建立染菌预测模型。利用预测样本对所建立染菌预测模型进行预测评估,其auc值为0. 83。结论利用所建立的伤寒沙门菌中试阶段发酵过程染菌预测模型可对发酵过程进行染菌预测。 展开更多
关键词 伤寒沙门菌 染菌 建模
基于Triton Ⅹ-114浊点萃取法在生物分子分离中的应用
5
作者 徐世友 于飞飞 (审校) 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2019年第2期220-227,共8页
液-液萃取等传统方法无法满足不断提高的生物分子分离要求,浊点萃取(cloud point extraction,CPE)以其良好的分离效果被广泛应用。本文基于Triton Ⅹ-114 CPE法在生物分子分离中的应用进行了概述,主要涉及CPE原理、过程、应用及技术改进。
关键词 浊点萃取 TRITON Ⅹ-114 分离
人血白蛋白琼脂培养基在A、C、Y、W_(135)群脑膜炎球菌培养中的应用
6
作者 吴元元 杨千苇 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2018年第8期835-837,840共4页
目的比较A、C、Y、W(135)群脑膜炎球菌冻干菌种在羊血琼脂培养基和人血白蛋白琼脂培养基中的复苏培养效果,为人血白蛋白琼脂培养基代替羊血琼脂培养基进行复苏培养提供依据。方法将A、C、Y、W(135)群脑膜炎球菌冻干菌种分别接种至... 目的比较A、C、Y、W(135)群脑膜炎球菌冻干菌种在羊血琼脂培养基和人血白蛋白琼脂培养基中的复苏培养效果,为人血白蛋白琼脂培养基代替羊血琼脂培养基进行复苏培养提供依据。方法将A、C、Y、W(135)群脑膜炎球菌冻干菌种分别接种至羊血琼脂培养基和人血白蛋白琼脂培养基中,待长满琼脂培养基后转至相同体积、相同成分的基础培养基中,培养过程中取样测定A600。结果 A、C群脑膜炎球菌在人血白蛋白琼脂培养基中复苏培养效果优于羊血琼脂培养基,而Y、W(135)群脑膜炎球菌在人血白蛋白琼脂培养基与羊血琼脂培养基复苏培养中效果相当。结论人血白蛋白琼脂培养基能够很好地应用于A、C、Y、W(135)群脑膜炎球菌的复苏培养。 展开更多
关键词 人血白蛋白 琼脂培养基 脑膜炎球菌
脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白NhhA研究进展 预览
7
作者 李正宇(综述) (审校) 《微生物学免疫学进展》 2018年第6期71-75,共5页
脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitides,Nm,以下简称脑膜炎球菌),是引起流行性脑脊髓膜炎疾病的主要病原体。NhhA(Neisseria hia homologue)是Nm的一种寡聚外膜蛋白。研究表明,NhhA在宿主-病原体相互作用中具有重要功能,如参与Nm无症状... 脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitides,Nm,以下简称脑膜炎球菌),是引起流行性脑脊髓膜炎疾病的主要病原体。NhhA(Neisseria hia homologue)是Nm的一种寡聚外膜蛋白。研究表明,NhhA在宿主-病原体相互作用中具有重要功能,如参与Nm无症状鼻咽黏膜定植,诱导巨噬细胞凋亡,具有免疫刺激功能等。该蛋白表面暴露,并在许多Nm菌株中都能表达,表明它有希望作为候选疫苗。现对NhhA的分子结构、在宿主-病原体相互作用中的功能以及作为疫苗候选物的研究现状等作一概述。 展开更多
关键词 脑膜炎奈瑟菌 NhhA 功能 疫苗 候选抗原
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超滤法纯化C群脑膜炎球菌荚膜多糖降解物的工艺优化
8
作者 周晖国 张海红 +3 位作者 袁菲 罗树权 李阿妮 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2018年第8期896-901,共6页
目的优化超滤法纯化C群脑膜炎球菌荚膜多糖降解物的工艺。方法以截留分子量为300 000的超滤膜对C群脑膜炎球菌荚膜多糖降解物进行超滤分离,以膜通量和多糖回收率为评价指标,优化方法中的超滤膜材质(300 k Da的聚醚砜膜和再生纤维素复... 目的优化超滤法纯化C群脑膜炎球菌荚膜多糖降解物的工艺。方法以截留分子量为300 000的超滤膜对C群脑膜炎球菌荚膜多糖降解物进行超滤分离,以膜通量和多糖回收率为评价指标,优化方法中的超滤膜材质(300 k Da的聚醚砜膜和再生纤维素复合膜)、透析次数(1-6次)、超滤缓冲液(0.15 mol/L Na Cl、0.5 mol/L Na Cl、50 mmol/L的PBS和H2O)、多糖初始溶解浓度(0.25、0.5和1 mg/m L)和超滤方式(浓缩补液超滤和恒体积超滤)。采用最佳条件对C群脑膜炎球菌荚膜多糖降解物进行检测。结果 C群脑膜炎球菌荚膜多糖降解物的最佳超滤条件为:以再生纤维素复合膜为超滤膜,0.15 mol/L Na Cl为超滤缓冲液,透析次数为5次,多糖初始溶解浓度为1.0 mg/m L,超滤方式为浓缩超滤。该方法可有效去除C群脑膜炎球菌荚膜多糖降解物中较大分子量的多糖组分,多糖回收率在80%以上,且可在一定程度上降低多糖水解物的内毒素含量。结论成功优化了超滤法纯化C群脑膜炎球菌荚膜多糖降解物的工艺,显著提高了工作效率。 展开更多
关键词 超滤 C群脑膜炎球菌 荚膜多糖 降解物 工艺优化
分光光度法测定W135群脑膜炎奈瑟菌生物量
9
作者 徐世友 周晖国 +3 位作者 于飞飞 许博 杨明明 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2017年第12期1326-1330,共5页
目的建立快速准确测量W135群脑膜炎奈瑟菌(Neissria meningitidis)生物量的紫外分光光度法。方法取W135群脑膜炎奈瑟菌发酵液进行系列浓度稀释,利用紫外-可见光分光光度法在最适吸收波长处测定各稀释度发酵液的A值,同时测定各浓度下... 目的建立快速准确测量W135群脑膜炎奈瑟菌(Neissria meningitidis)生物量的紫外分光光度法。方法取W135群脑膜炎奈瑟菌发酵液进行系列浓度稀释,利用紫外-可见光分光光度法在最适吸收波长处测定各稀释度发酵液的A值,同时测定各浓度下细菌数、菌体干湿重,建立W135群脑膜炎奈瑟菌A值与菌体干湿重、细菌数间的关系曲线,利用所建立的回归方程计算细菌生物量。取4组不同浓度的W135群脑膜炎奈瑟菌培养液,采用建立的方法测量细菌生物量并与实际测量值对比,验证该方法的准确性。结果 W135群脑膜炎奈瑟菌A_(450)值与菌体干湿重、细菌数呈线性关系,R~2分别为0.990、0.980和0.926。利用所建立的回归方程得到的生物量结果与实际测量结果无统计学差异(P〉0.05)。结论利用所建立的A值与生物量的关系方程可快速简便地检测到W135群脑膜炎奈瑟菌生物量的变化。 展开更多
关键词 W135群脑膜炎奈瑟菌 紫外分光光度法 生物量
细菌培养基中营养物质的代谢及优化方法 预览 被引量:3
10
作者 杨明明 李国晏 《微生物学免疫学进展》 2016年第5期90-94,共5页
细菌培养基是细菌体外生长的基质,其中营养物质是细菌生长、繁殖的基本成分。因此,探索培养基中营养物质的代谢,优化培养基配方,对细菌体外培养的研究及规模化生产有着重要的指导意义。现就细菌培养基分类、营养物质、细菌在营养物... 细菌培养基是细菌体外生长的基质,其中营养物质是细菌生长、繁殖的基本成分。因此,探索培养基中营养物质的代谢,优化培养基配方,对细菌体外培养的研究及规模化生产有着重要的指导意义。现就细菌培养基分类、营养物质、细菌在营养物质中的代谢及培养基优化方法等方面予以总结。 展开更多
关键词 细菌 培养基 营养物质 代谢 优化
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脑膜炎奈瑟菌荚膜多糖合成及相关基因的研究进展 预览 被引量:1
11
作者 于飞飞 张海红 《微生物学免疫学进展》 2016年第4期48-53,共6页
脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitides,Nm)是流行性脑脊髓膜炎的主要致病菌,荚膜多糖(Capsular polysaccharides,CPS)是该菌主要的致病因子。近年来,随着基因组学与分子生物学的不断发展,CPS合成相关基因越来越受到关注。重点对Nm ... 脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitides,Nm)是流行性脑脊髓膜炎的主要致病菌,荚膜多糖(Capsular polysaccharides,CPS)是该菌主要的致病因子。近年来,随着基因组学与分子生物学的不断发展,CPS合成相关基因越来越受到关注。重点对Nm CPS的合成及相关基因作用作一综述。 展开更多
关键词 脑膜炎奈瑟菌 荚膜多糖 合成 基因
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SEC-HPLC法测定CN10冻干品中CN10的蛋白含量 被引量:1
12
作者 梁凌宇 高雪峰 +3 位作者 张轶 杨军 蒋琳 《药物生物技术》 CAS 2014年第3期246-249,共4页
通过高效液相色谱法(HPLC)建立一种测定CN10冻干品中蛋白含量的方法。以0.1 mol/L TrisHCl、0.1 moL/L NaCl、pH 7.2缓冲液作为流动相,色谱柱为TSK2000SWxl(4.6 mm×250 mm)凝胶过滤色谱柱,体积流量为0.65 mL/min,进样体积50μL,检... 通过高效液相色谱法(HPLC)建立一种测定CN10冻干品中蛋白含量的方法。以0.1 mol/L TrisHCl、0.1 moL/L NaCl、pH 7.2缓冲液作为流动相,色谱柱为TSK2000SWxl(4.6 mm×250 mm)凝胶过滤色谱柱,体积流量为0.65 mL/min,进样体积50μL,检测波长选择280 nm,依据HPLC外标法原理建立CN10含量测定方法,并根据《生物制品质量控制分析方法验证技术审评一般原则》对方法进行相关验证。结果:在该条件下,CN10和人血白蛋白之间有良好的分离度,CN10浓度在0.1~0.6 mg/mL的范围内与其峰面积呈良好的线形关系(R2=0.998 1),最低检出限和最低定量限分别0.01 mg/mL和0.04 mg/mL。方法的重复性RSD(%)为0.38,平均回收率为(100.40±2.28)%。用该方法检测CN10冻干制剂中的CN10蛋白含量时,不受人血白蛋白的影响,具有较高的准确性和专属性。 展开更多
关键词 冻干品 SEC-HPLC 外标法 含量测定 CNTF 人血白蛋白
重组人睫状神经营养因子的聚乙二醇化修饰 预览 被引量:2
13
作者 梁凌宇 雷清 +3 位作者 高雪峰 杨军 蒋琳 《生物技术通讯》 CAS 2014年第1期65-67,共3页
目的:研究重组人睫状神经营养因子(rhCNTF)突变体的聚乙二醇(PEG)化修饰,对rhCNTF的PEG化产物进行初步分离纯化及相关生物活性检测。方法:采用分子生物学技术经点突变得到rhCNTF的突变体cNm通过实验设计研究CN10的最佳PEG化条件... 目的:研究重组人睫状神经营养因子(rhCNTF)突变体的聚乙二醇(PEG)化修饰,对rhCNTF的PEG化产物进行初步分离纯化及相关生物活性检测。方法:采用分子生物学技术经点突变得到rhCNTF的突变体cNm通过实验设计研究CN10的最佳PEG化条件;采用分子筛层析方式对偶联产物进行初步纯化,最后用ELISA和小鼠体重增长抑制法检测PEG化后的CN。。蛋白的生物活性。结果:能运用mPEG—MAL对CN,。进行定点修饰,PEG化后用Superdex200能够分离CN10;PEG化后的CN10每2d腹腔注射1次,对小鼠体重的增长抑制率可达50%,与rhCNTF每天注射2次的体重增长抑制作用相当。结论:CN10蛋白在PEG化修饰后,其减重效应持续时间明显延长。 展开更多
关键词 人睫状神经营养因子 聚乙二醇化修饰 纯化 体重增长抑制
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凝胶法和动态浊度法检测注射用重组人睫状神经营养因子中细菌内毒素含量 预览 被引量:2
14
作者 杨军 +1 位作者 蒋琳 高雪峰 《微生物学免疫学进展》 2013年第4期37-41,共5页
目的采用凝胶法和动态浊度法检测注射用重组人睫状神经营养因子(CNTF)中细菌内毒素含量,控制制品质量,消除临床热原反应的发生。方法供试品参照《中华人民共和国药典》(2010年版)三部附录ⅫE细菌内毒素检查法中的凝胶法和动态浊度... 目的采用凝胶法和动态浊度法检测注射用重组人睫状神经营养因子(CNTF)中细菌内毒素含量,控制制品质量,消除临床热原反应的发生。方法供试品参照《中华人民共和国药典》(2010年版)三部附录ⅫE细菌内毒素检查法中的凝胶法和动态浊度法要求进行检查。结果注射用重组人睫状神经营养因子溶液在100μg/mL质量浓度下,确定内毒素限值为10 EU/mL。凝胶法和动态浊度法检查后,注射用重组人睫状神经营养因子内毒素含量均符合规定。结论凝胶法和动态浊度法可用于注射用重组人睫状神经营养因子的细菌内毒素检查。 展开更多
关键词 注射用重组人睫状神经营养因子 细菌内毒素检查 凝胶法 浊度法
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包涵体蛋白复性技术研究进展 预览 被引量:18
15
作者 包义风(综述) 蒋琳(审校) 《微生物学免疫学进展》 2012年第2期 84-88,共5页
本文对原核表达的包涵体蛋白的分离,洗涤,溶解及复性方法做了一个简单的总结。同时就国内外近几年的最新复性方法进行了概述。并分析了各种复性方法的利弊。
关键词 包涵体 溶解 复性 添加剂
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细胞增殖法检测rhCNTF生物活性方法的建立和验证 被引量:2
16
作者 李萍 陆俭 +2 位作者 马亚茹 蒋琳 《药物生物技术》 CAS CSCD 2012年第1期 55-59,共5页
建立检测rhCNTF生物活性的TF-1.CN5a.l细胞增殖法(简称细胞增殖法),并用该法检测不同浓度的CNTF1和CNTF2,确定样品的检测范围;不同时间重复检测样品CNTF4,证明细胞检测法的重复性。检测国际标准品CNTF、CNTF3、其它细胞因子及CNTF冻... 建立检测rhCNTF生物活性的TF-1.CN5a.l细胞增殖法(简称细胞增殖法),并用该法检测不同浓度的CNTF1和CNTF2,确定样品的检测范围;不同时间重复检测样品CNTF4,证明细胞检测法的重复性。检测国际标准品CNTF、CNTF3、其它细胞因子及CNTF冻干保护液对TF-1.CN5a.l细胞的增殖效应,验证细胞检测法的专属性。实验结果显示,CNTF的有效检测范围为40~0.001 ng/mL;CNTF4的活性均值为1.42×106IU/mg;rhCNTF、NGF与TF-1.CN5a.1细胞存在明显量效关系,而其它细胞因子则不存在量效关系,但NGF与CNTF是不同性质的细胞因子。细胞增殖法有较好的重复性和专属性,该法能很好地应用于rhCNTF的生物活性测定。 展开更多
关键词 重组人睫状神经营养因子 验证 TF-1.CN5a.1细胞增殖法 生物活性
重组人睫状神经营养因子生物学活性检测方法的建立 被引量:2
17
作者 李萍 蒋琳 +2 位作者 马亚茹 卜晓萍 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2010年第6期646-648,653共4页
目的建立重组人睫状神经营养因子(Recombinant human ciliary neurotrophic factor,rhCNTF)的生物学活性检测方法 ,在其研制和生产中进行有效的质量控制。方法应用鸡胚睫状神经节细胞培养法和鸡胚背根神经节法,对rhCNTF进行定性和半... 目的建立重组人睫状神经营养因子(Recombinant human ciliary neurotrophic factor,rhCNTF)的生物学活性检测方法 ,在其研制和生产中进行有效的质量控制。方法应用鸡胚睫状神经节细胞培养法和鸡胚背根神经节法,对rhCNTF进行定性和半定量检测;应用TF-1.CN5a.1细胞增殖法检测rhCNTF的活性;应用正常小鼠减重法,对rhCNTF的减肥生物学活性进行检测。并探索4种方法的实验条件及优缺点。结果上述4种方法均能用于rhCNTF的生物学活性测定,以TF-1.CN5a.1细胞增殖法及正常小鼠减重法结合使用最为有效。结论可联合使用TF-1.CN5a.1细胞增殖法和正常小鼠减重法,对重组rhCNTF进行质量控制。 展开更多
关键词 睫状神经营养因子 神经节 生物学活性
重组大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位表达条件的优化及其佐剂作用 预览 被引量:1
18
作者 雷清 黄思扬 +3 位作者 梁凌宇 马亚茹 蒋琳 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2008年第3期 174-177,共4页
目的优化重组大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)的表达条件,并检测其黏膜佐剂作用。方法通过向LB培养基中添加葡萄糖(终浓度为0.5%)、低温培养诱导等方法诱导LTB的表达;采用阳离子交换法对目的蛋白进行纯化;以LTB作为佐剂进行... 目的优化重组大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)的表达条件,并检测其黏膜佐剂作用。方法通过向LB培养基中添加葡萄糖(终浓度为0.5%)、低温培养诱导等方法诱导LTB的表达;采用阳离子交换法对目的蛋白进行纯化;以LTB作为佐剂进行免疫试验。结果可溶性重组大肠杆菌不耐热肠毒素(LTB)的表达量明显提高,纯化后蛋白含量达95%以上,经纯化的LTB作为三价流感裂解疫苗或gD抗原的佐剂免疫BALB/c小鼠,可提高小鼠血清及黏膜的抗体水平,且其效果与铝化剂及福氏佐剂相当或更高。结论优化了LTB的表达条件,且表达的LTB具有较强的黏膜免疫佐剂作用。 展开更多
关键词 大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位 黏膜免疫 表达 纯化 佐剂
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重组人睫状神经营养因子突变体的构建、表达及生物活性分析 预览 被引量:5
19
作者 雷清 +2 位作者 梁凌宇 高雪峰 蒋琳 《生物技术》 CAS CSCD 2007年第4期 16-18,共3页
目的:通过对原始CNTF的突变改造,降低表达蛋白的免疫原性,同时增加其稳定性,以期能用于临床治疗肥胖症。方法:以原始CNTF为模板,去掉N端的12个氨基酸、C端的14个氨基酸,并将C端末2个氨基酸点突变为极性较强的赖氨酸,在大肠杆菌中表达... 目的:通过对原始CNTF的突变改造,降低表达蛋白的免疫原性,同时增加其稳定性,以期能用于临床治疗肥胖症。方法:以原始CNTF为模板,去掉N端的12个氨基酸、C端的14个氨基酸,并将C端末2个氨基酸点突变为极性较强的赖氨酸,在大肠杆菌中表达,获得CNTF-T突变体。结果:基因序列分析与原设计吻合,目的蛋白表达量占全菌体的35%左右,表达蛋白以包涵体形式存在,经变性、复性、DEAE-FF纯化,纯度可达95%以上,小鼠体内生物活性测定,能明显抑制小鼠体重增长,且CNTF-T的生物活性比原始序列CNTF的活性高。结论:突变的CNTF-T有望成为新一代的生物减肥制剂应用于临床。 展开更多
关键词 睫状神经营养因子(CNTF) 突变体 基因表达 生物活性 减肥
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重组戊型肝炎病毒抗原工程菌的发酵及表达产物的纯化 预览
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作者 梁凌宇 +2 位作者 杨军 高雪峰 蒋琳 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2007年第7期 519-521,共3页
目的建立重组戊型肝炎病毒抗原工程菌的发酵和目的蛋白纯化工艺。方法在三角烧瓶中,探讨不同的诱导剂浓度和培养基对菌体密度和目的蛋白表达量的影响;在10L发酵罐中,探讨诱导时间、补料方式、溶氧量对菌体密度和目的蛋白表达量的影响。... 目的建立重组戊型肝炎病毒抗原工程菌的发酵和目的蛋白纯化工艺。方法在三角烧瓶中,探讨不同的诱导剂浓度和培养基对菌体密度和目的蛋白表达量的影响;在10L发酵罐中,探讨诱导时间、补料方式、溶氧量对菌体密度和目的蛋白表达量的影响。根据目的蛋白的理化特性建立纯化工艺。结果重组HEV抗原工程菌在10L发酵罐分批补料培养中,采用0.1mmol/L的IPTG诱导4h,目的蛋白表达量约为25%,目的蛋白产率约为2.88g/L,且以包涵体形式存在。经过对包涵体粗纯、复性、纯化,SDS-PAGE分析,纯度可达95%以上。结论建立了周期短、产率高且稳定可靠的发酵及纯化工艺,为重组HEV抗原的大规模生产奠定了基础。 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒抗原 工程菌 发酵 纯化
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