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基于上转换荧光标记的氯噻啉免疫层析方法研究 预览 被引量:2
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作者 修德 尤红杰 +2 位作者 杨家川 施海燕 王鸣 《分析化学》 CSCD 北大核心 2018年第3期413-421,共9页
利用氯噻啉单克隆抗体标记的NaYF4:Yb,Er上转换荧光纳米材料(Upconversion nanoparticles,UCNPs)建立了一种简单、快速、灵敏的氯噻啉上转换荧光免疫层析(Upconversion immunochromatographic assay,UICA)方法。将氨基功能化的UCNPs与... 利用氯噻啉单克隆抗体标记的NaYF4:Yb,Er上转换荧光纳米材料(Upconversion nanoparticles,UCNPs)建立了一种简单、快速、灵敏的氯噻啉上转换荧光免疫层析(Upconversion immunochromatographic assay,UICA)方法。将氨基功能化的UCNPs与氯噻啉单克隆抗体偶联制备UICA试纸条,使用外接980nm激光光源的荧光分光光度计实现对氯噻啉的定量检测。在优化的UICA工作条件下,通过交叉反应(Cross-reactivity,CR)、添加回收和高效液相色谱(High performance liquid chromatography,HPLC)实验评价了UICA的敏感性、特异性、精确性和准确性。在最优条件(pH 8.0、0.3mol/L NaCl、2.5%甲醇、0.2%PEG2000)下,UICA可在25 min内完成对氯噻啉的检测,其抑制中浓度(Half-maximal inhibition concentration,IC50)为97.37ng/mL,检出限(IC10)为26.30ng/mL,线性范围(IC10~IC90)为26.30~363.08ng/mL。除吡虫啉外,UICA对其它氯噻啉结构类似物无交叉反应。在田水、土壤、梨、桃、小麦、黄瓜、番茄、大米等基质中的平均添加回收率为71.8%~97.2%,相对标准偏差为0.7%~10.7%。UICA对田水和梨实际样品的检测结果与HPLC的检测结果相符。 展开更多
关键词 氯噻啉 单克隆抗体 农药残留 上转换荧光免疫层析 上转换荧光纳米材料
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腐霉利的光解及水解特性研究 被引量:1
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作者 侯丽娜 孟鸽 +3 位作者 温勇 施海燕 修德 王鸣 《农药学学报》 CSCD 北大核心 2018年第3期340-347,共8页
为研究腐霉利的消解特性,采用乙腈提取,弗罗里硅土柱净化,建立了油菜叶片中腐霉利残留的气相色谱-电子捕获检测器(GC-ECD)分析方法;并在室内模拟条件下,研究了腐霉利在油菜叶片表面的光解行为,以及不同初始浓度、不同pH值缓冲液、不... 为研究腐霉利的消解特性,采用乙腈提取,弗罗里硅土柱净化,建立了油菜叶片中腐霉利残留的气相色谱-电子捕获检测器(GC-ECD)分析方法;并在室内模拟条件下,研究了腐霉利在油菜叶片表面的光解行为,以及不同初始浓度、不同pH值缓冲液、不同浓度Fe^2+、Fe^3+和NO3^–、NO2^–对水溶液中腐霉利光解的影响;通过气相色谱-电子轰击电离源质谱仪(GCEIMS)鉴定了其在甲醇、丙酮和乙腈溶液中的光解产物;同时研究了不同pH值缓冲液和阴、阳离子表面活性剂对腐霉利水解特性的影响。结果表明:腐霉利添加水平为0.05、0.2、2及12 mg/kg时,其在油菜叶片中的平均回收率为80%~100%,相对标准偏差为2.3%~7.8%。腐霉利在油菜叶片表面的消解动态符合一级动力学方程,紫外灯下的消解半衰期为1.03 h。腐霉利在水溶液中的光解速率随其初始浓度的升高而减慢;其在酸性条件下稳定,碱性条件下易光解;NO3^–、NO2^–、Fe^2+及Fe^3+均可抑制腐霉利在水溶液中的光解,因此可用作为其光猝灭剂。共鉴定出两种腐霉利在甲醇、丙酮和乙腈溶液中的光解产物,分别为其单脱氯化产物C13H12ClNO2和其脱甲基化产物C12H9Cl2NO2。腐霉利在碱性条件下易水解,酸性条件下水解较慢;阴离子表面活性剂十二烷基磺酸钠(SDS)对其水解无影响,而阳离子表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)则可促进其水解。研究结果可为腐霉利的合理使用及其环境安全性评价提供参考。 展开更多
关键词 腐霉利 残留 消解 油菜 光解 紫外光解 光解产物 水解
基于三唑磷残留限量值的多检测线免疫试纸条的制备与应用 预览 被引量:1
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作者 龚航 刘贝贝 +9 位作者 李盼 何丹 郭逸蓉 王利民 修德 王鸣 刘凤权 徐振林 张存政 王丽 《分析化学》 CSCD 北大核心 2018年第6期938-946,共9页
建立了基于三唑磷残留限量值(MRL)的免疫层析检测方法,可裸眼观察判断谷物、蔬菜和水果中的三唑磷农药残留水平。以粒径20 nm的胶体金标记三唑磷单克隆抗体于金标垫上,包被不同浓度的三唑磷包被原(检测线T1、T2、T3线)、羊抗小鼠Ig ... 建立了基于三唑磷残留限量值(MRL)的免疫层析检测方法,可裸眼观察判断谷物、蔬菜和水果中的三唑磷农药残留水平。以粒径20 nm的胶体金标记三唑磷单克隆抗体于金标垫上,包被不同浓度的三唑磷包被原(检测线T1、T2、T3线)、羊抗小鼠Ig G抗体(质控线C线)于硝酸纤维素(NC膜)上,与吸水垫及PVC底板组合成层析试纸条。以大米、甘蓝和苹果为对象,优化了样品前处理方法、提取试剂等条件。结果表明,基于1/10三唑磷MRL值的试纸条(I)对三唑磷的裸眼观察检测灵敏度可达0.005、0.01和0.02μg/m L,优化调整后获得试纸条Ⅱ灵敏度设定为国标GB2763中的三唑磷MRL值依次为0.05、0.1和0.2μg/m L,并与3条检测线一一对应。结合前处理方法优化结果,样品经乙腈提取后,用PBS稀释10倍或者等体积溶剂置换后检测,此两种试纸条在8~12 min内均可准确判定农产品中三唑磷的残留是否超过MRL值,同时多区间定量范围的设定亦可较为准确地定量其残留值,结果与GC方法一致。本研究采用基于MRL值的3条检测线,对检测结果的判定更为直接、准确,无需换算,为基于MRL农产品安全性的快速判断提供了更为直观、简单、准确的方法。 展开更多
关键词 三唑磷 免疫层析试纸条 残留限量值 快速检测
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氯噻啉胶体金增强免疫层析分析方法的建立 预览 被引量:6
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作者 施海燕 盛恩泽 +2 位作者 马明 修德 王鸣 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2017年第3期403-408,共6页
利用生物素-链霉亲和素的高亲和作用,研制了一种简便、快速、高灵敏的氯噻啉胶体金增强免疫层析分析方法(Gold immunochromatographic assay,GICA)。将氯噻啉抗体和生物素化DNA与13 nm胶体金双标记,将链霉亲和素与41 nm胶体金标记,制... 利用生物素-链霉亲和素的高亲和作用,研制了一种简便、快速、高灵敏的氯噻啉胶体金增强免疫层析分析方法(Gold immunochromatographic assay,GICA)。将氯噻啉抗体和生物素化DNA与13 nm胶体金双标记,将链霉亲和素与41 nm胶体金标记,制备了氯噻啉胶体金增强免疫层析试纸条。系统优化了试纸条的工作条件,并通过交叉反应、添加回收和高效液相色谱(High performance liquid chromatography,HPLC)验证评价GICA的敏感性、特异性、精确性和准确性。在最优条件下,试纸条可在10 min内实现可视化判读,检出限(LOD)为25 ng/mL,除与吡虫啉有较大交叉反应外,与其它类似化合物无交叉反应。氯噻啉在河水、大米、黄瓜、番茄、梨、甘蓝和苹果样品中的添加浓度为0.05,0.5和5μg/g时,GICA的检测结果均符合添加水平。在未知浓度河水和梨样品的检测中,GICA的检测结果与HPLC方法相符。 展开更多
关键词 氯噻啉 单克隆抗体 金标免疫层析分析 链霉亲和素 生物素
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菊酯类农药广谱型免疫层析试纸条的研究及应用 预览 被引量:4
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作者 胡静 郭逸蓉 +7 位作者 梁晓 刘贤金 朱国念 刘凤权 王鸣 王利民 修德 张存政 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1900-1906,共7页
建立了菊酯类农药广谱型免疫层析检测方法,可同时检测水果、蔬菜中12种甲氰菊酯、溴氰菊酯、氯氰菊酯、三氟氯氰菊酯农药残留。以粒径20 nm的胶体金标记羊抗小鼠IgG抗体于金标垫上,分别固定包被原(检测线,T线)、兔抗山羊IgG抗体(质控... 建立了菊酯类农药广谱型免疫层析检测方法,可同时检测水果、蔬菜中12种甲氰菊酯、溴氰菊酯、氯氰菊酯、三氟氯氰菊酯农药残留。以粒径20 nm的胶体金标记羊抗小鼠IgG抗体于金标垫上,分别固定包被原(检测线,T线)、兔抗山羊IgG抗体(质控线,C线)于硝酸纤维素膜(NC膜)上,与吸水垫及聚氯乙烯(PVC)底板组合成层析试纸条。10 g样品经乙腈提取,PBS稀释4倍,取100μL与菊酯类农药的单克隆抗体混合后,直接用于试纸条检测。结果表明,试纸条对甲氰菊酯、溴氰菊酯、氯氰菊酯、三氟氯氰菊酯农药的裸眼观察检测灵敏度为0.5,5.0,5.0和5.0μg/mL,检测时长为8~10 min,采用QuEChERS方法,方法检测灵敏度可提高16倍。对蔬菜和水果的方法验证表明,除辣椒基质干扰呈假阳性外,其它样本的检测结果均与GC方法结果一致。试纸条采用金标羊抗小鼠IgG二抗的方法,使检测结果的重现性更好、更稳定,且抗基质干扰能力强,为菊酯类农药的累积毒性检测提供了新方法。 展开更多
关键词 菊酯类农药 免疫层析试纸条 快速检测
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噬菌体展示肽库技术及其在农药残留免疫分析中的研究进展 被引量:1
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作者 修德 施海燕 王鸣 《食品安全质量检测学报》 2014年第12期3955-3961,共7页
噬菌体展示技术是一种特殊的基因工程重组表达技术,已经作为一种强大的工具运用在不同的研究中,包括筛选抗体和酶的配体、筛选小分子的受体、基因工程抗体等。免疫分析作为农药残留快速筛查技术被广泛研究,利用抗体从噬菌体展示肽库中... 噬菌体展示技术是一种特殊的基因工程重组表达技术,已经作为一种强大的工具运用在不同的研究中,包括筛选抗体和酶的配体、筛选小分子的受体、基因工程抗体等。免疫分析作为农药残留快速筛查技术被广泛研究,利用抗体从噬菌体展示肽库中淘选竞争物,可以加快异源免疫分析方法的建立;利用抗原抗体复合物从噬菌体展示肽库中淘选抗免疫复合体多肽,可建立非竞争免疫分析方法,丰富农药的免疫分析模式。本文从噬菌体展示技术的原理、噬菌体展示肽库的构建和噬菌体展示肽库的筛选方面概述了噬菌体展示肽库技术;从模拟表位筛选、抗免疫复合体筛选和新免疫分析方法方面阐述了噬菌体展示肽库技术在农药等小分子免疫分析中的应用;并对噬菌体展示肽库技术的研究和应用前景进行了展望。 展开更多
关键词 噬菌体展示技术 噬菌体展示肽库 农药残留 免疫分析
抗噻菌灵单克隆抗体的制备及异源IC-ELISA检测方法的建立 预览 被引量:1
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作者 王玉燕 修德 +2 位作者 钱国良 李刚 刘凤权 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期 38-44,共7页
为建立噻菌灵酶免疫检测方法,制备3种噻菌灵的半抗原(H1、H2和H3)。利用活泼酯法制备免疫抗原H1-BSA、H3-BSA和包被抗原H1-OVA、H2-OVA、H3-OVA。采用杂交瘤细胞融合方法获得4株稳定分泌抗噻菌灵单克隆抗体的细胞株,分别命名为1-4G9、... 为建立噻菌灵酶免疫检测方法,制备3种噻菌灵的半抗原(H1、H2和H3)。利用活泼酯法制备免疫抗原H1-BSA、H3-BSA和包被抗原H1-OVA、H2-OVA、H3-OVA。采用杂交瘤细胞融合方法获得4株稳定分泌抗噻菌灵单克隆抗体的细胞株,分别命名为1-4G9、1-6D3、3-1F9和3-5D4。采用间接竞争酶联免疫法(IC-ELISA),将上述4株抗体分别与3种包被抗原进行组合,从中选择出一个最优组合:H3-OVA/1-6D3。据此建立的异源IC-ELISA检测方法对噻菌灵的IC50为10.9μg.L-1,检测限(IC10)为2.2μg.L-1,与3种噻菌灵类似物的交叉反应率均小于0.1%;在自来水、苹果、梨的添加回收试验中,IC-ELISA法测定的回收率依次为95.9%~118.1%、90.0%~117.6%、74.9%~95.6%;HPLC法测定的回收率依次为92.7%~97.6%、98.9%~100.9%、91.6%~105.4%,IC-ELISA法与HPLC法测定结果基本一致。上述结果表明:抗噻菌灵单克隆抗体酶免疫检测具有很强的特异性和准确性。 展开更多
关键词 噻菌灵 单克隆抗体 IC-ELISA HPLC
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抗吡虫啉单克隆抗体的制备及鉴定 被引量:2
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作者 李刚 纪宪勇 +4 位作者 钱国良 修德 秦娜 王杰 刘凤权 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期943-951,共9页
为制备灵敏度高,特异性强的抗吡虫啉单克隆抗体,建立经济、快速、准确的吡虫啉残留免疫学分析方法,采用分子模拟技术分析吡虫啉及其类似农药的电荷分布后,选择1-[6-(2-羧乙硫基-3-吡啶)甲基]-N-硝基-2-咪唑啉亚胺(H1)作为免疫半抗原... 为制备灵敏度高,特异性强的抗吡虫啉单克隆抗体,建立经济、快速、准确的吡虫啉残留免疫学分析方法,采用分子模拟技术分析吡虫啉及其类似农药的电荷分布后,选择1-[6-(2-羧乙硫基-3-吡啶)甲基]-N-硝基-2-咪唑啉亚胺(H1)作为免疫半抗原,1-(6-氯-3-吡啶甲基)-3-羧丙基-N-硝基-2-咪唑啉亚胺(H2)作为包被半抗原,利用NHS酯法将H1和H2分别与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联合成免疫原与包被原。免疫BALB/c小鼠后,采用常规杂交瘤技术共获得2株稳定分泌抗吡虫啉单克隆抗体的细胞株2F11/A9和2G6/G12,其分泌的抗体类型分别为IgG3和IgG1,两细胞株的腹水抗体效价均达到了1∶128 000,IC50分别为5.3 ng/mL和28.3 ng/mL,检测限分别为1.1 ng/mL和7.7 ng/mL,两种抗体与6种吡虫啉的结构类似物均无明显的交叉反应。抗吡虫啉单抗的制备为吡虫啉残留免疫学检测方法的建立及免疫检测产品的研发奠定了基础。 展开更多
关键词 吡虫啉 分子模拟 单克隆抗体 酶联免疫吸附法
草木樨愈伤组织的诱导和芽的再生 预览 被引量:3
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作者 李建科 黄俊轩 +4 位作者 李双跃 杨静慧 刘艳军 修德 张雷 《天津农学院学报》 CAS 2007年第1期 28-30,共3页
为了建立草木樨的高效再生体系和基因转化体系,以黑龙江草木樨为材料,用MS、1/2MS为基本培养基,添加不同种类和浓度的植物激素,对草木樨的愈伤组织培养和绿色芽点培养进行了研究。结果表明,诱导其愈伤组织的培养基以MS+2,4-D1.0... 为了建立草木樨的高效再生体系和基因转化体系,以黑龙江草木樨为材料,用MS、1/2MS为基本培养基,添加不同种类和浓度的植物激素,对草木樨的愈伤组织培养和绿色芽点培养进行了研究。结果表明,诱导其愈伤组织的培养基以MS+2,4-D1.0mg·L^-1+KT0.3mg·L^-1为最好,愈伤组织的形成率可达90%;诱导绿色芽点的培养基以MS+2,4.D0.2mg·L^-1+6-BA1.0-1.5mg·L^-1为最好,芽点形成率可达45%。最后,将再生芽转入生根培养基1/2MS+IAA0.5mg·L^-1上,生根率可达100%。 展开更多
关键词 草木樨 愈伤组织 激素
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