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大黄鱼中哈维氏弧菌毒力及耐药特性分析 被引量:1
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作者 吴立婷 廖金轩 +5 位作者 庞茂达 周艳 孙利厂 王冉 张辉 《食品安全质量检测学报》 CAS 2019年第8期2111-2119,共9页
目的分析鉴定海产养殖中主要病原哈维氏弧菌的毒力及耐药特性。方法采集来自于网箱养殖区病死大黄鱼,分离幵鉴定哈维氏弧菌,利用微量肉汤稀释法分析分离株对13种抗生素的敏感特性,PCR鉴定耐药基因(tetA、tetB、ermA、ermB、ermC、mecA、... 目的分析鉴定海产养殖中主要病原哈维氏弧菌的毒力及耐药特性。方法采集来自于网箱养殖区病死大黄鱼,分离幵鉴定哈维氏弧菌,利用微量肉汤稀释法分析分离株对13种抗生素的敏感特性,PCR鉴定耐药基因(tetA、tetB、ermA、ermB、ermC、mecA、aac(6’)-Ib、oqxA、sul1、sul2、mcr-1)及其毒力基因。结果从病料中分离幵鉴定出54株哈维氏弧菌,耐药分析表明对硫酸粘杆菌素、庆大霉素、四环素、氨苄西林、复方新诺明和阿莫西林均耐药, 96.2%的分离株对头孢噻呋, 92.6%的分离株对链霉素、阿米卡星表现为耐药, 88.9%的分离株对恩诺沙星, 87.1%的分离株对卡那霉素呈现高度耐受特性。所有分离株同时对9种抗生素显示100%耐药,同时耐受10种抗生素的菌株有94.4%,同时对11和12种抗生素耐受的菌株分别达到85.2%和64.8%,对13种抗生素均产生耐药的菌株达到37.0%(20/54)。耐药基因分析表明四环素类tetA为主要耐药基因,检出率高达81.5%;氨基糖苷类aac(6’)-Ib,β-内酰胺类mecA,磺胺类sul1、sul2,喹诺酮类oqxA和大环内酯类ermA、ermC分别检出4~7株。毒力基因分析表明toxR携带率高达75.9%。结论本研究分析了海产养殖中主要病原哈维氏弧菌感染状况,其耐药严重且普遍携带毒力基因,表明哈维氏弧菌耐药和毒力对海产养殖造成重要威胁。同时本研究为弧菌病的有效防治提供参考依据。 展开更多
关键词 哈维氏弧菌 耐药特征 耐药基因 毒力基因
1株宽噬菌谱肠出血性大肠杆菌噬菌体的分离及生物学特性分析 预览
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作者 孙利厂 周艳 +6 位作者 张莉莉 庞茂达 何涛 张辉 何灵尘 王冉 《中国动物传染病学报》 北大核心 2018年第6期58-63,共6页
本研究从养殖场采集的污水样品中分离到宽噬菌谱肠出血性大肠杆菌烈性噬菌体V_EcoM_C1,并进行了噬菌斑、噬菌谱、形态学(透射电镜)、遗传物质、酸碱及热稳定性、一步生长曲线等生物学特性及控制养殖环境中的肠出血性大肠杆菌的污染研究... 本研究从养殖场采集的污水样品中分离到宽噬菌谱肠出血性大肠杆菌烈性噬菌体V_EcoM_C1,并进行了噬菌斑、噬菌谱、形态学(透射电镜)、遗传物质、酸碱及热稳定性、一步生长曲线等生物学特性及控制养殖环境中的肠出血性大肠杆菌的污染研究。结果表明:噬菌体V_EcoM_C1呈现出典型裂解性噬菌体特征,空斑透亮,无晕环,空斑边缘整齐清晰;噬菌体V_EcoM_C1噬菌斑直径为1.0~1.5mm;噬菌体V_EcoM_C1头部椭圆形,长径约86nm,横径约54nm;噬菌体V_EcoM_C1具有可收缩性尾,尾长约76nm,直径约10nm,头部与尾部被颈圈隔开;噬菌体V_EcoM_C1可裂解5种不同血清型肠出血性大肠杆菌,且噬菌斑透亮,具有较宽噬菌谱;噬菌体V_EcoM_C1在30℃~50℃保持高活性;噬菌体V_EcoM_C1在pH5~10稳定;噬菌体V_EcoM_C1感染宿主菌的潜伏期约10min,爆发持续时间约60min,平均爆发量为26,具有较高的裂解活性;噬菌体V_EcoM_C1可以控制养殖环境中的肠出血性大肠杆菌证明该噬菌体可以有效杀灭养殖环境(奶牛料槽表面)中的肠出血性大肠杆菌。综上所述,V_EcoM_C1为1株宽噬菌谱肠出血性大肠杆菌烈性噬菌体,可用于肠出血性大肠杆菌噬菌体制剂的研发。 展开更多
关键词 肠出血性大肠杆菌 噬菌体 分离 生物学特性
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加工环境中单核细胞增生性李斯特菌耐药特征分析
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作者 吴立婷 吴新宇 +6 位作者 庞茂达 何涛 周艳 孙利厂 王冉 张辉 《食品安全质量检测学报》 CAS 2018年第7期1496-1500,共5页
目的分析在流通过程中加工环境来源的食源性李斯特菌耐药性及耐药基因携带情况,探讨加工环境对该菌的影响。方法收集2016-2017年分离自加工环境中的71株单核细胞增生性李斯特菌,利用微量肉汤稀释法对8种抗菌药物进行药物敏感性分析,并采... 目的分析在流通过程中加工环境来源的食源性李斯特菌耐药性及耐药基因携带情况,探讨加工环境对该菌的影响。方法收集2016-2017年分离自加工环境中的71株单核细胞增生性李斯特菌,利用微量肉汤稀释法对8种抗菌药物进行药物敏感性分析,并采用PCR鉴定11种耐药基因(tet A、tet M、tet S、erm A、erm B、erm C、mec A、aac(6’)-Ib、van A、van B、cfr)。结果 71株Lm对庆大霉素(11.27%)、氨苄西林(4.22%)、头孢他啶(98.59%)、环丙沙星(97.18%)、四环素(21.12%)、红霉素(15.49%)、林可霉素(92.96%)均具有不同程度的耐药性,对万古霉素敏感。其中以耐受3~6种抗菌药为主,耐药情况较为严重。耐药基因检测表明四环素类tet A,tet M为主要耐药基因,检出率高达50%以上,其次为红霉素类erm A、erm B、erm C,检出率约11%,氨基糖苷类aac(6’)-Ib的检出率为5.63%。结论加工环境单核细胞增生性李斯特菌的耐药性呈上升趋势,其耐药表型与耐药基因型并不完全一致,从而表明加工环境中存在影响单核细胞增生性李斯特菌耐药性因素,同时为食源性李斯特菌病的防治及预警提供参考依据。 展开更多
关键词 单核细胞增生性李斯特菌 耐药性 耐药基因
江苏部分地区牛源无乳链球菌流行病学研究 预览 被引量:1
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作者 庞茂达 孙利厂 +2 位作者 何涛 王冉 《扬州大学学报:农业与生命科学版》 北大核心 2017年第4期25-29,共5页
对江苏省部分地区的7个规模化奶牛场进行采样,通过16S rNDA测序、多位点序列分型、荚膜分型,明确无乳链球菌的流行情况及流行株类型;并通过检测毒力因子,分析菌株生化特性、溶血能力及耐药性,明确无乳链球菌流行株的生物学特性及致病因... 对江苏省部分地区的7个规模化奶牛场进行采样,通过16S rNDA测序、多位点序列分型、荚膜分型,明确无乳链球菌的流行情况及流行株类型;并通过检测毒力因子,分析菌株生化特性、溶血能力及耐药性,明确无乳链球菌流行株的生物学特性及致病因子。结果表明:自327份乳房炎奶样中共分离到84株无乳链球菌,该菌在不同奶牛场中的阳性率存在较大差异(阳性率为0-51.3%),主要流行株类型为ST67、ST103及ST568型菌株;牛源菌株的荚膜分型为Ⅰa型或Ⅱ型,均具有PI-2b型菌毛及乳糖操纵子,能够代谢乳糖,且具有不同的溶血能力;另外,所有牛源菌株对头孢噻肟均未产生耐药性。这一研究为无乳链球菌在奶牛场中的临床监测和防控提供了重要信息,有助于进一步阐明该菌的致病机制。 展开更多
关键词 奶牛 无乳链球菌 多位点序列分型 毒力因子 生化特性 耐药性
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噬菌体cocktail JS-SP1对沙门菌流行菌株混合感染的裂菌动力学及灭菌效果研究 预览
5
作者 张辉 +1 位作者 周艳 王冉 《中国抗生素杂志》 CSCD 北大核心 2017年第10期858-864,共7页
目的 研究沙门菌噬菌体cocktail JS-SP1对沙门菌流行菌株混合感染的裂菌动力学及灭菌效果。方法 从50份污水及粪样样品中分离获得6株高裂菌活性的沙门菌噬菌体,将其按等比例混合制成沙门菌噬菌体cocktail JS-SP1,通过测定A600分析其对6... 目的 研究沙门菌噬菌体cocktail JS-SP1对沙门菌流行菌株混合感染的裂菌动力学及灭菌效果。方法 从50份污水及粪样样品中分离获得6株高裂菌活性的沙门菌噬菌体,将其按等比例混合制成沙门菌噬菌体cocktail JS-SP1,通过测定A600分析其对6株沙门菌流行菌株混合菌液的裂菌动力学,并且对0、4和10h这3个时间点的活细菌计数,分析JS-SP1的灭菌效果。结果与混合细菌组、单株噬菌体处理组相比,JS-SP1处理组可以有效而且快速降低混合液的A600值。与其他处理组相比,4h时,JSSP1处理组细菌数下降极显著(P〈0.01);10h时,降到10CFU以下(P〈0.01)。结论 噬菌体cocktail JS-SP1对混合细菌感染具有快速彻底的灭菌能力,其有可能成为一种有效控制沙门菌污染的潜在治疗手段和产品。 展开更多
关键词 沙门菌 噬菌体混合制剂 杀菌效果 动力学 混合感染
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穿透肽嵌合金黄色葡萄球菌噬菌体裂解酶LysJS25-R9的表达及其活性分析 预览
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作者 孙利厂 周艳 +5 位作者 张莉莉 庞茂达 何涛 张辉 王冉 《中国抗生素杂志》 CSCD 北大核心 2017年第10期865-870,共6页
前期分离得到1株具有较强裂解能力的金黄色葡萄球菌噬菌体vBSauMJS25。测序后发现,噬菌体vBSauMJS25的裂解酶基因LysJS25与裂解酶LysK同源性最高,且可以广谱裂解金黄色葡萄球菌。为提高LysJS25细胞穿透效果,设计了穿透肽嵌合裂解酶LysJS... 前期分离得到1株具有较强裂解能力的金黄色葡萄球菌噬菌体vBSauMJS25。测序后发现,噬菌体vBSauMJS25的裂解酶基因LysJS25与裂解酶LysK同源性最高,且可以广谱裂解金黄色葡萄球菌。为提高LysJS25细胞穿透效果,设计了穿透肽嵌合裂解酶LysJS25-R9,经原核表达和纯化,体外评价了LysJS25-R9裂解活性、细胞穿透活性及细胞内杀菌活性。结果表明:LysJS25-R9对葡萄球菌表现出较好的裂解能力,杀菌效率较原裂解酶提高2.1倍。激光共聚焦及细胞内杀菌活性实验证实LysJS25-R9进入MAC-T细胞内杀菌。该研究为穿透肽嵌合裂解酶的设计提供了一个良好的例证,同时有助于裂解酶细胞穿透性改造的设计。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 噬菌体 裂解酶 细胞穿透肽
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噬菌体裂解酶结构域重构及其裂解功能分析 预览 被引量:1
7
作者 张辉 周艳 +5 位作者 杨振泉 朱如意 周晨露 张莉莉 王冉 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2017年第6期134-138,共5页
为了获得广谱噬菌体裂解酶,根据裂解酶结构及种属特异性,将金黄色葡萄球菌噬菌体裂解酶Ply187CHAP及酶K的SH3b重新合成,并同时将末端引入单核细胞增生性李斯特菌噬菌体裂解酶LysZ5结合结构域,构建具有能够裂解金黄色葡萄球菌及李斯特菌... 为了获得广谱噬菌体裂解酶,根据裂解酶结构及种属特异性,将金黄色葡萄球菌噬菌体裂解酶Ply187CHAP及酶K的SH3b重新合成,并同时将末端引入单核细胞增生性李斯特菌噬菌体裂解酶LysZ5结合结构域,构建具有能够裂解金黄色葡萄球菌及李斯特菌的多功能裂解酶。SDS-PAGE结果表明,融合结构域的重构酶蛋白Ply187KS-Z5大小约为58 kDa,其在金黄色葡萄球菌及李斯特菌平板表面能够形成透明裂解圈。分析对金黄色葡萄球菌及李斯特菌在生肉表面的裂解活性表明,嵌合酶蛋白Ply187-KS能够有效裂解金黄色葡萄球菌,作用1 h后菌落数降至2.16 log,而重构酶Ply187KS-Z5不仅裂解金黄色葡萄球菌并同时能够裂解李斯特菌,且重构酶针对金黄色葡萄球菌噬菌体的裂解活性与Ply187-KS裂解效果相当,从而表明裂解酶结合结构域重组将是获得高效广谱裂解酶的新途径。 展开更多
关键词 裂解酶 金黄色葡萄球菌 单核细胞增生性李斯特菌
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携带质粒李斯特菌耐药及重金属抵制特性研究
8
作者 张辉 +2 位作者 周艳 张莉莉 王冉 《现代食品科技》 EI CAS 北大核心 2015年第4期58-62,共5页
鉴定单核细胞增生性李斯特菌(Lm)携带质粒特性,分析携带质粒Lm对抗生素、重金属镉及苯扎氯铵的敏感性。结果表明,11株Lm携带内源性质粒;所有Lm菌株对阿莫西林、红霉素和利福平均敏感(22/22),对头孢拉定100%耐药(22/22);其中5株对盐酸万... 鉴定单核细胞增生性李斯特菌(Lm)携带质粒特性,分析携带质粒Lm对抗生素、重金属镉及苯扎氯铵的敏感性。结果表明,11株Lm携带内源性质粒;所有Lm菌株对阿莫西林、红霉素和利福平均敏感(22/22),对头孢拉定100%耐药(22/22);其中5株对盐酸万古霉中度耐受,部分菌株对盐酸环丙沙星(17/22)、硫酸新霉素(16/22)及盐酸四环素素(9/22)具有一定耐受性。耐镉分析表明,菌株对重金属镉呈现抵制特性(14/22),且均为携带质粒菌株;而在苯扎氯铵敏感性检测中,仅3株携带质粒Lm菌株对苯扎氯铵具有抵制性。对Lm菌株进行噬菌体杀菌检测,结果均能够被噬菌体识别并裂解。综上所述,Lm分离株耐药性增强,且对苯扎氯铵和镉有抵制特性,而噬菌体能够杀灭抵制菌株,为控制耐药及抵制性菌株污染提供了新途径。 展开更多
关键词 单核细胞增生性李斯特菌 抗生素 重金属 噬菌体
沙门氏菌裂解性噬菌体的分离鉴定及其生物学特性 预览 被引量:13
9
作者 张鹏禹 +4 位作者 周艳 张莉莉 张辉 陶明煊 王冉 《食品科学》 CSCD 北大核心 2015年第5期131-136,共6页
从家禽屠宰场污水中,以肠炎沙门氏菌ATCC13076和禽沙门氏菌CVCC2184为宿主菌,分离到两株裂解性沙门氏菌噬菌体,分别命名为v B_Sen M-PA13076(简称PA13076)和v B_Sen M-PC2184(简称PC2184)。同时对这两株噬菌体进行了噬菌斑、噬菌谱系(... 从家禽屠宰场污水中,以肠炎沙门氏菌ATCC13076和禽沙门氏菌CVCC2184为宿主菌,分离到两株裂解性沙门氏菌噬菌体,分别命名为v B_Sen M-PA13076(简称PA13076)和v B_Sen M-PC2184(简称PC2184)。同时对这两株噬菌体进行了噬菌斑、噬菌谱系(含耐药菌)、形态学(透射电镜)、遗传物质、酸碱及热稳定性、最佳感染复数、一步生长曲线等生物学特性研究。结果表明:两株噬菌体的裂解空斑均透亮清晰;除对本身宿主菌产生强裂解作用,还裂解其他沙门氏菌,为宽噬菌谱,其中PA13076能强裂解一株耐氨苄青霉素ATCC13076转化菌株(A+13076),PC2184则能裂解另一株耐氨苄青霉素CVCC2184转化菌株(A+2184);电镜观察这两株噬菌体均为肌尾病毒科;遗传物质为ds DNA;p H值和温度耐受能力较好;PA13076、PC2184最佳感染复数分别为0.01、10,潜伏期分别为20、30 min,爆发期分别为70、60 min,平均爆发量分别为21、23。 展开更多
关键词 肠炎沙门氏菌 裂解性噬菌体 生物学特性 耐药性
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禽致病性大肠杆菌噬菌体vB_EcoM_JS09裂解酶的表达及其活性分析 被引量:4
10
作者 周艳 +2 位作者 张辉 张莉莉 王冉 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1109-1113,共5页
为研究禽致病性大肠杆菌噬菌体vB_EcoM_JS09编码的裂解酶对宿主大肠杆菌的裂解作用,克隆表达了禽致病性大肠杆菌噬菌体vB_EcoM_JS09的裂解酶,并检测了裂解酶的菌体内外裂解活性。利用PCR扩增了禽致病性大肠杆菌噬菌体vB_EcoM_JS09裂解... 为研究禽致病性大肠杆菌噬菌体vB_EcoM_JS09编码的裂解酶对宿主大肠杆菌的裂解作用,克隆表达了禽致病性大肠杆菌噬菌体vB_EcoM_JS09的裂解酶,并检测了裂解酶的菌体内外裂解活性。利用PCR扩增了禽致病性大肠杆菌噬菌体vB_EcoM_JS09裂解酶基因(Lysin基因),构建了重组表达质粒pET-32a(+)-LysJS09,测序验证后转化至大肠杆菌BL21(DE3)进行IPTG诱导表达。在37℃IPTG浓度为1.0mmol/L诱导4h表达效果最好。重组融合蛋白LysJS09在BL21(DE3)中获得了高表达,在N端具有His标签,其分子质量约为38.9ku。重组融合蛋白以分泌型方式表达,经His-trap HP(GE)亲和层析柱纯化后获得的重组蛋白LysJS09的纯度为97%。裂解活性试验表明,该裂解酶单独使用和加入EDTA(0.1mol/L)均无体外酶活性;但菌体内裂解试验表明,表达的裂解酶对宿主菌具有一定的裂解作用。 展开更多
关键词 革兰阴性菌 禽致病性大肠杆菌噬菌体 噬菌体裂解酶
一株宽宿主谱裂解性大肠杆菌噬菌体的进化分析 预览 被引量:3
11
作者 周艳 +2 位作者 张辉 张莉莉 王冉 《中国动物传染病学报》 CAS 2014年第6期71-76,共6页
裂解性噬菌体能够特异性裂解细菌,本研究分析了一株从自然界中分离的宽宿主谱裂解性大肠杆菌噬菌体的种属和进化关系。前期用Adams双层平板琼脂法从猪场污水中分离纯化出一株裂解性噬菌体v B_Eco M_JS09,裂解谱分析能够裂解禽致病性大... 裂解性噬菌体能够特异性裂解细菌,本研究分析了一株从自然界中分离的宽宿主谱裂解性大肠杆菌噬菌体的种属和进化关系。前期用Adams双层平板琼脂法从猪场污水中分离纯化出一株裂解性噬菌体v B_Eco M_JS09,裂解谱分析能够裂解禽致病性大肠杆菌和产肠毒素大肠杆菌。扩增分析gene18、gene 23序列,并根据gp18和gp23氨基酸序列构建系统进化树,分析JS09的遗传进化关系。结果表明噬菌体v B_Eco M_JS09基因组为ds DNA,属于有尾噬菌体目、肌尾噬菌体科、T4-like噬菌体、T-evens亚群。其gp18氨基酸序列与大肠杆菌噬菌体RB69同源性最高,为100%;gp23氨基酸序列与大肠杆菌T4噬菌体同源性最高为96%。该结果为禽致病性大肠杆菌和产肠毒素大肠杆菌的防控提供了生物学基础。 展开更多
关键词 禽致病性大肠杆菌 产肠毒素大肠杆菌 宽宿主谱裂解性大肠杆菌噬菌体 T4-like噬菌体 进化分析
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多种噬菌体单独及混合使用的喷雾灭菌研究 预览
12
作者 张辉 +2 位作者 李国峰 周艳 王冉 《食品科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第19期10-13,共4页
以大肠杆菌噬菌体EK99-C为例分析噬菌体EK99-C在空间的喷雾灭菌效率,5mL、1×104CFU/mL的大肠杆菌K99进行人工喷洒污染,5min后喷洒1×109PFU/mL的噬菌体5mL,并且在喷洒后0.5、1、2h分别检测残存的大肠杆菌K99数量。然后,以... 以大肠杆菌噬菌体EK99-C为例分析噬菌体EK99-C在空间的喷雾灭菌效率,5mL、1×104CFU/mL的大肠杆菌K99进行人工喷洒污染,5min后喷洒1×109PFU/mL的噬菌体5mL,并且在喷洒后0.5、1、2h分别检测残存的大肠杆菌K99数量。然后,以与大肠杆菌噬菌体喷雾灭菌实验中所用的相同剂量的细菌和噬菌体数量对其他5株食源性致病菌(其中涉及大肠杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌和李斯特菌)的噬菌体进行喷雾灭菌实验,并只在喷洒后2h检测残存的细菌数量。结果表明:喷洒噬菌体EK99-C后,在0.5、1、2h时平板上的残存的细菌数均接近于0CFU,其中2h时噬菌体EK99-C灭菌更彻底;噬菌体单独作用组和按体积比等比例混合作用组,均能有效杀灭宿主菌,其中,噬体PSA-116喷雾灭菌效果最好,能杀灭100%的宿主菌,噬菌体EK88-4、EK99-C和FWLLm3的杀灭效率约为99%左右。而噬菌体SS-92和PSA-6以喷雾灭菌的方式可杀灭约80%的宿主菌。6种噬菌体按体积比等比例混合作用后2h时的细菌残存个数少于18.50CFU,杀菌效率大于98.7%。 展开更多
关键词 噬菌体 混合使用 喷雾灭菌
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李斯特菌噬菌体的分离鉴定及其裂解特性 预览 被引量:4
13
作者 张辉 王冉 《食品科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期 228-232,共5页
以单核细胞增生性李斯特菌(Lm)为宿主菌,从畜禽养殖区污水中分离(Lm)特异的噬菌体,分析其生物学特性、裂解特性及其在食品中的灭菌效果。用双层平板法从污水样中分离Lm噬菌体,PEG/NaCl法沉淀纯化噬菌体,负染色后电镜观察。分... 以单核细胞增生性李斯特菌(Lm)为宿主菌,从畜禽养殖区污水中分离(Lm)特异的噬菌体,分析其生物学特性、裂解特性及其在食品中的灭菌效果。用双层平板法从污水样中分离Lm噬菌体,PEG/NaCl法沉淀纯化噬菌体,负染色后电镜观察。分析噬菌体对宿主菌的裂解特性及其对温度和pH值的敏感性,同时对该噬菌体进行宿主谱系分析。将噬菌体运用于即食性食品中,分析其潜在的灭菌效果。结果表明:分离的噬菌体为裂解性噬菌体,属长尾噬菌体科,命名为LipG2-5。体外能够高效裂解宿主菌,对温度及pH值亦有良好的耐受性。基因组酶切分析表明,LipG2-5为双链DNA噬菌体。噬菌体谱系分析表明,该噬菌体为1株宽宿谱噬菌体,在固态及液态即食性食品中能够高效杀灭Lm。 展开更多
关键词 单核细胞增生性李斯特菌 噬菌体 生物防控
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大肠杆菌K88噬菌体的分离鉴定及其生物学特性 预览 被引量:15
14
作者 王冉 韩晗 +2 位作者 张辉 王恬 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2012年第4期163-167,共5页
分离鉴定裂解性产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)K88噬菌体,并研究其生物学特性及裂菌效力。用双层平板法从猪场污水中分离噬菌体,通过透射电镜和酶切基因组对获得的噬菌体进行鉴定;同时测定了噬菌体最佳感染复数、一步生长曲线、酸碱稳... 分离鉴定裂解性产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)K88噬菌体,并研究其生物学特性及裂菌效力。用双层平板法从猪场污水中分离噬菌体,通过透射电镜和酶切基因组对获得的噬菌体进行鉴定;同时测定了噬菌体最佳感染复数、一步生长曲线、酸碱稳定性、热稳定性等噬菌体的生物学特性及其体外裂菌效力。结果表明分离获得了一株产肠毒素性大肠杆菌K88强裂解性噬菌体,命名为PK88-4;其噬菌斑清晰透亮,周围无晕环;电镜显示:其头部呈正多面体对称,有可伸缩性尾部;核酸类型为双链DNA(基因组大小约60kb);该噬菌体能耐受60℃左右高温、在pH值为5~10内效价稳定;最佳感染复数为0.01;潜伏期为10min,暴发期为40min,裂解量为40;在5h内对培养液中的大肠杆菌杀灭率将近100%。PK88-4是一株强裂解性肌尾科大肠杆菌K88噬菌体,具有裂解周期短、杀菌能力强等特点.为畜牧业防治产肠毒索性大肠杆菌K88感染提供了新的思路。 展开更多
关键词 产肠毒素性大肠杆菌K88 裂解性噬菌体 生物学特性 裂菌效力
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志贺氏菌噬菌体空间杀菌效力的研究 预览 被引量:1
15
作者 张辉 王冉 《现代食品科技》 EI CAS 北大核心 2012年第1期 1-4,22,共5页
将福氏志贺氏菌噬菌体SF-2A、痢疾志贺氏菌噬菌体SD-11及宋氏志贺氏菌噬菌体SS-92以等比例混合后进行气雾喷洒分析其在空间的杀菌效力,以期在食品生产和加工中控制食源性志贺氏菌的污染。首先在空间分析不同噬菌体气雾喷洒后的杀菌活性... 将福氏志贺氏菌噬菌体SF-2A、痢疾志贺氏菌噬菌体SD-11及宋氏志贺氏菌噬菌体SS-92以等比例混合后进行气雾喷洒分析其在空间的杀菌效力,以期在食品生产和加工中控制食源性志贺氏菌的污染。首先在空间分析不同噬菌体气雾喷洒后的杀菌活性和最佳作用浓度,其次将福氏、痢疾及宋氏志贺氏菌以等量进行混合,以3×105cfu/mL的终浓度进行人工喷洒污染,并以3×108cfu/mL的噬菌体混合物进行气雾喷洒,分别在喷洒后1 h,2 h和3 h检测宿主菌的数量。结果显示,噬菌体SF-2A、SD-11及SS-92均能在空间有效灭活其相应宿主菌,其混合溶液作用3 h后已检测不到志贺氏菌。由此可见,混合噬菌体能够有效控制志贺氏菌的污染,这为食品生产及加工中环境中的病原菌的污染控制提供了新途径。 展开更多
关键词 志贺氏菌 噬菌体 空间杀菌
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李斯特菌噬菌体体内消长规律及其免疫特性分析 预览 被引量:1
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作者 张辉 王冉 《食品科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第21期169-172,共4页
将李斯特菌噬菌体经口服灌入小鼠体内,分析噬菌体在小鼠体内的消长规律及特异性免疫应答,探索噬菌体作为生物抗菌剂在食品生物防控中的安全性。分别将噬菌体LipG2-5以1×108PFU单次及连续3次灌服小鼠,并在灌服后不同时间点检测粪样... 将李斯特菌噬菌体经口服灌入小鼠体内,分析噬菌体在小鼠体内的消长规律及特异性免疫应答,探索噬菌体作为生物抗菌剂在食品生物防控中的安全性。分别将噬菌体LipG2-5以1×108PFU单次及连续3次灌服小鼠,并在灌服后不同时间点检测粪样中噬菌体的数量并对小鼠进行称质量。对小鼠增质量分析表明,摄入噬菌体组小鼠体质量与对照组无显著性差异。在不同时间点采集小鼠血清及肠道黏膜,分析其特性抗体产生情况。结果表明,噬菌体灌服后随着时间的推移,其数量相应下降。在第7天,两组噬菌体摄入组粪样中均检测不到噬菌体。血清ELISA检测结果表明,灌服噬菌体小鼠能够产生较低水平的噬菌体特异性抗体,但与对照组无显著性差异。同样,在第35天并没有检测到较高水平的黏膜IgA抗体。由此可见,噬菌体在进入机体后,可以通过消化道自然排出,在体内无残留,不产生抗体。 展开更多
关键词 单核细胞增生性李斯特菌 噬菌体 抗体
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粪源金霉素暴露对土壤微生物毒性效应的田间试验研究
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作者 王冉 魏瑞成 +1 位作者 李维 《安全与环境学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期13-16,共4页
通过田间小区试验,研究了含金霉素残留的鸡粪施用于农田对农田土壤中微生物的毒性效应。选取蔬菜试验田,划分4个2 m×2 m试验小区,除对照组(不施用任何肥料)外,其他3块分别施用不含金霉素的鸡粪和含46.4 mg/kg、 97.6 mg/kg金霉... 通过田间小区试验,研究了含金霉素残留的鸡粪施用于农田对农田土壤中微生物的毒性效应。选取蔬菜试验田,划分4个2 m×2 m试验小区,除对照组(不施用任何肥料)外,其他3块分别施用不含金霉素的鸡粪和含46.4 mg/kg、 97.6 mg/kg金霉素的鸡粪。在试验期内,分别在不同时间采集土壤样品,测定土壤中微生物数量(细菌、真菌和放线菌)、土壤的呼吸强度、土壤中金霉素抗性细菌数量及土壤中微生物多样性变化等指标。结果表明,两个质量比的粪源金霉素(46.4 mg/kg和97.6 mg/kg)暴露分别降低了土壤中细菌数量24.1%和27.2%,降低了放线菌12.1%和22.9%,减少了真菌数量1.92%和2.52%,并且影响了土壤微生物多样性,同时增加了土壤中金霉素抗性细菌数量及其比率。同时发现,粪源金霉素的暴露随时间延长对土壤微生物的毒性影响有减缓趋势。这可能与随时间延长金霉素被降解或土壤微生物对金霉素产生了适应有关。 展开更多
关键词 畜牧 兽医科学其他学科 粪源金霉素 土壤微生物 生态毒性
两种防霉剂抑制黄曲霉菌及禾谷镰刀菌的生长和饲料防霉效果研究 预览 被引量:4
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作者 王冉 《饲料工业》 北大核心 2011年第6期 53-55,共3页
研究的主要目的是评估并比较丙酸钙复合型和高效复合型防霉剂抑制黄曲霉菌及禾谷镰刀菌的生长和饲料防霉效果。研究采用体外抑菌(禾谷镰刀菌F.0705和黄曲霉菌)试验和饲料破坏性试验两种方法进行。结果表明:两种防霉剂对禾谷镰刀菌(F... 研究的主要目的是评估并比较丙酸钙复合型和高效复合型防霉剂抑制黄曲霉菌及禾谷镰刀菌的生长和饲料防霉效果。研究采用体外抑菌(禾谷镰刀菌F.0705和黄曲霉菌)试验和饲料破坏性试验两种方法进行。结果表明:两种防霉剂对禾谷镰刀菌(F.0705)和黄曲霉菌均有抑制作用,而且,随着防霉剂浓度的增大,其抑菌效果增强;从饲料破坏性试验来看:在第9 d和13 d采样时,两种防霉剂处理过的饲料霉菌总数极显著低于空白对照组(P〈0.01),而且添加的防霉剂浓度越大,饲料中霉菌总数越少。总体来看,高效复合型防霉剂的抑制效果优于丙酸钙复合型。 展开更多
关键词 丙酸钙复合型防霉剂 高效复合型防霉剂 饲料破坏试验 杯碟法
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宽噬菌谱肠炎沙门氏菌噬菌体的生物学特性 预览 被引量:8
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作者 张辉 王冉 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2011年第5期 1117-1121,共5页
以肠炎沙门氏菌为宿主菌,对从鸡场粪尿污水中分离到的肠炎沙门氏菌噬菌体PSA-6a进行生物学特性鉴定。利用双层平板法分离裂解性噬菌体,并采用噬菌斑形态观察、透射电镜分析、噬菌谱测定、最佳感染复数和一步生长曲线等试验对分离到的噬... 以肠炎沙门氏菌为宿主菌,对从鸡场粪尿污水中分离到的肠炎沙门氏菌噬菌体PSA-6a进行生物学特性鉴定。利用双层平板法分离裂解性噬菌体,并采用噬菌斑形态观察、透射电镜分析、噬菌谱测定、最佳感染复数和一步生长曲线等试验对分离到的噬菌体进行生物学特性鉴定。结果表明该噬菌体在宿主菌ATCC 13076平板上形成的噬菌斑为透亮的空斑,直径为0.5~1.0 mm,边缘清晰,无晕环;它具有宽噬菌谱的特性,不仅可强裂解宿主菌ATCC 13076,还可裂解其他4株沙门氏菌和1株大肠杆菌K88;透射电镜观察显示此噬菌体头部呈圆形,直径约81 nm,有一长尾,尾长约200 nm;一步生长曲线显示PSA-6a潜伏期为60 min,爆发期为50 min,裂解量为22;最佳感染复数为1。 展开更多
关键词 肠炎沙门氏菌 噬菌体 噬菌谱 一步生长曲线
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高效液相色谱-串联质谱法检测鸡肉中金霉素、差向金霉素 被引量:8
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作者 裴燕 魏瑞成 +4 位作者 陈明 黄思瑜 谢恺舟 王冉 《分析试验室》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期54-58,共5页
建立了高效液相色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)快速测定鸡肉中差向金霉素、金霉素的检测方法。均质样品用pH4.0 EDTA-McIIvaine缓冲溶液提取,经Oasis HLB SPE小柱净化,采用LC-ESI-MS/MS和正离子多反应监测(MRM)模式检测。差向金霉素在0.... 建立了高效液相色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)快速测定鸡肉中差向金霉素、金霉素的检测方法。均质样品用pH4.0 EDTA-McIIvaine缓冲溶液提取,经Oasis HLB SPE小柱净化,采用LC-ESI-MS/MS和正离子多反应监测(MRM)模式检测。差向金霉素在0.025~0.8μg/mL,金霉素在0.005~0.2μg/mL浓度范围内线性关系良好,相关系数r均大于0.99。在0.05、0.10、0.15 mg/kg的加标水平下,回收率为73.0%~101.6%,相对标准偏差(RSD)为2.1%~12%。差向金霉素和金霉素的定量限分别为30.0、10.0μg/kg。该方法样品处理简单,可同时检测差向金霉素和金霉素的残留,且准确度和精密度均符合残留分析的要求。 展开更多
关键词 固相萃取 高效液相色谱串联质谱 差向金霉素 金霉素 鸡肉
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