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害虫遗传防控技术的研究与应用
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作者 徐雪娇 +2 位作者 杨婕 尤民生 《中国科学:生命科学》 CSCD 北大核心 2019年第8期938-950,共13页
遗传防控技术作为传统有害生物防控方式的替代策略,自20世纪50年代以来在世界各国受到广泛的关注,被认为是一类有利于人类健康、食品安全和农业可持续发展的害虫种群防控技术,同时也为日益严峻的生物入侵问题提供了解决方案.本文综述了... 遗传防控技术作为传统有害生物防控方式的替代策略,自20世纪50年代以来在世界各国受到广泛的关注,被认为是一类有利于人类健康、食品安全和农业可持续发展的害虫种群防控技术,同时也为日益严峻的生物入侵问题提供了解决方案.本文综述了不育昆虫技术(sterile insect technique,SIT)、释放携带显性致死基因昆虫技术(release of insects carrying a dominant lethal,RIDL)和基因驱动技术(gene drive)的基本原理及部分应用案例,比较了不同技术的优势与限制因素,并介绍了相关研究中常见的几种基因整合策略,以期进一步改进害虫综合治理的基础研究和技术研发. 展开更多
关键词 遗传防控 不育昆虫技术 释放携带显性致死基因昆虫技术 基因驱动技术
小菜蛾饲料品系转食寄主植物的适合度及其硫苷代谢相关基因表达 预览
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作者 董玉红 +5 位作者 郑玲 荆晓东 周立 张玲玲 李晓桐 《福建农业学报》 北大核心 2018年第1期54-60,共7页
硫代葡萄糖苷硫酸酯酶(GSS)及其修饰因子(SUMF1)是小菜蛾代谢十字花科植物化学防御物质硫苷的关键因子,但其在人工饲料品系小菜蛾适应寄主植物方面的功能研究中鲜有报道。本研究检测了硫苷代谢相关基因GSS和SUMF1在2种人工饲料品... 硫代葡萄糖苷硫酸酯酶(GSS)及其修饰因子(SUMF1)是小菜蛾代谢十字花科植物化学防御物质硫苷的关键因子,但其在人工饲料品系小菜蛾适应寄主植物方面的功能研究中鲜有报道。本研究检测了硫苷代谢相关基因GSS和SUMF1在2种人工饲料品系小菜蛾(AD和G88)不同发育阶段的表达模式,发现GSS基因在2种饲料品系间的表达模式较为相似,GSS1和GSS2均在3龄和4龄幼虫中大量表达;SUMF1基因的表达模式则差别较大,未呈现明显规律性。AD和G88品系小菜蛾从初孵幼虫起被转移至萝卜子叶上饲养,与取食人工饲料相比幼虫存活率下降、发育历期延长、蛹重降低;幼虫中肠的GSS1和GSS2表达水平显著下降,AD品系的SUMF1a基因在幼虫中肠的表达亦显著下降。本研究通过探究饲料品系小菜蛾转食寄主植物后适合度与GSS和SUMF1基因表达水平的关系,揭示了硫苷代谢相关基因的表达水平很可能受到植物因子调控,并与人工饲料品系小菜蛾对寄主植物的适应性密切相关。 展开更多
关键词 小菜蛾 硫代葡萄糖苷硫酸酯酶 硫酸酯酶修饰因子 人工饲料品系 转寄主
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小菜蛾对苏云金芽胞杆菌(Bt)的抗性研究进展
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作者 尤士骏 刘昭霞 +3 位作者 熊磊 廖金英 尤民生 《应用昆虫学报》 CSCD 北大核心 2018年第6期951-962,共12页
小菜蛾Plutella xylostella(L.)是为害十字花科蔬菜的一种重要的世界性害虫,由于其分布范围广、繁殖速度快、抗性水平高,已经成为最难防治的害虫之一。基于苏云金芽胞杆菌Bacillus thuringiensis(Bt)开发的杀虫剂在小菜蛾生物防治中发... 小菜蛾Plutella xylostella(L.)是为害十字花科蔬菜的一种重要的世界性害虫,由于其分布范围广、繁殖速度快、抗性水平高,已经成为最难防治的害虫之一。基于苏云金芽胞杆菌Bacillus thuringiensis(Bt)开发的杀虫剂在小菜蛾生物防治中发挥重要的作用,但小菜蛾作为在田间最早对Bt产生抗性的害虫,其抗性发展及抗性机理也引起了全世界的广泛关注。本文概述了小菜蛾的发生危害及其抗药性的研究动态、苏云金芽胞杆菌的起源、发展及应用,分析了小菜蛾对Bt杀虫毒素产生抗药性及其抗性机理,并从抗性发展风险、转基因油菜种植和进一步深入开展抗性机理的研究三个方面进行了展望,以期为优化小菜蛾抗药性的治理策略、提高生物农药和Bt作物的控害效能提供借鉴和参考。 展开更多
关键词 小菜蛾 BT毒素 抗药性 抗性机理 抗药性治理
低氧胁迫下小菜蛾的两性生命表研究 预览 被引量:1
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作者 刘天生 温梅芳 +2 位作者 柯富士 尤民生 《福建农业学报》 北大核心 2017年第3期305-311,共7页
为探明低氧胁迫对小菜蛾生长发育和种群动态参数的影响,为了解小菜蛾适应低氧环境提供相关的理论依据.在福建福州和西藏拉萨分别饲养福州品系的小菜蛾,将人工气候箱温度控制在(5±1)C,空气相对湿度(65±5)%,光周期L:D=8:... 为探明低氧胁迫对小菜蛾生长发育和种群动态参数的影响,为了解小菜蛾适应低氧环境提供相关的理论依据.在福建福州和西藏拉萨分别饲养福州品系的小菜蛾,将人工气候箱温度控制在(5±1)C,空气相对湿度(65±5)%,光周期L:D=8:16.按照年龄-龄期两性生命表理论的统计方法记录原始数据,组建两性生命表,共记录3代.结果表明,通过分析两种氧环境下小菜蛾的生长发育历期、繁殖力和存活率等指标,以及相关的种群动态参数后发现,低氧环境对小菜蛾的发育历期有显著的影响:与在福州饲养的小菜蛾相比,在拉萨饲养的小菜蛾整体发育历期显著变短;但随着世代的增加在拉萨饲养的小菜蛾发育历期逐渐变长,到第3代的时候在拉萨饲养的小菜蛾的整体发育历期显著长于在福州饲养的小菜蛾,但生殖力无显著性差异.两种不同氧含量环境下小菜蛾的种群动态参数存在显著差异,在拉萨饲养的小菜蛾的r、λ、R0、T随世代增加逐渐增加,且第一代的r、λ、R0、T都显著低于第2代或第3代.说明在低氧环境下,小菜蛾在经过一代至二代的快速适应后提高了对低氧的耐受性,但是整体发育历期显著缩短,存在一定的适合度代价;当世代发展到第3代时,在2种含氧量环境下小菜蛾的生殖力、存活率及种群动态参数r、λ、R0、T都无显著性差异,说明小菜蛾有很强的适应能力,小菜蛾可以在比较短的时间适应青藏高原的低氧环境,低氧并不能成为阻止小菜蛾向高原扩散的障碍. 展开更多
关键词 小菜蛾 低氧胁迫 适应性 生命表
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取食十字花科植物的植食性昆虫与寄主植物硫苷的互作 预览 被引量:1
5
作者 马小丽 尤民生 《昆虫学报》 CSCD 北大核心 2017年第9期1093-1104,共12页
十字花科植物含有硫苷-黑芥子酶防御系统,也被称作“芥子油炸弹”,是目前研究最多的植物防御机制。硫苷和黑芥子酶分开储存在不同的植物细胞中,当植物受到昆虫取食、病原微生物侵害、机械损伤等危害时,植物体内的黑芥子酶与硫苷结合,催... 十字花科植物含有硫苷-黑芥子酶防御系统,也被称作“芥子油炸弹”,是目前研究最多的植物防御机制。硫苷和黑芥子酶分开储存在不同的植物细胞中,当植物受到昆虫取食、病原微生物侵害、机械损伤等危害时,植物体内的黑芥子酶与硫苷结合,催化其产生有毒的水解产物——异硫氰酸酯(isothiocyanate,ITC)、腈类化合物(nitrile)和其他活性物质等,从而避免或者减少植物受到损害。然而在长期的协同进化过程中,十字花科蔬菜害虫也具有了相应的反防御机制才能够适应寄主。这种反防御机制根据硫苷种类的不同,也具有多样性,且不仅表现在十字花科广食性和寡食性昆虫之间,还表现在广食性和寡食性昆虫之内。本文综述了十字花科植物硫苷类型、硫苷-黑芥子酶防御体系和害虫诱导的植物硫苷防御反应,并从不同十字花科蔬菜害虫如何代谢、隔离、利用和转运硫苷等方面讨论了害虫的反防御机制,以期为研究十字花科蔬菜害虫与寄主植物协同进化提供借鉴和参考。 展开更多
关键词 硫苷-黑芥子酶 协同进化 反防御 广食性昆虫 寡食性昆虫
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昆虫DNA甲基化的研究进展 被引量:1
6
作者 徐雪娇 +2 位作者 陈楠菁 尤民生 《应用昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期1082-1093,共12页
DNA甲基化是表观遗传学的一个分支学科,因其在调控基因表达和生物体许多生理生化过程具有重要的作用,近年来逐渐受到广泛关注。昆虫由于种类繁多,变态发育和表型复杂,研究DNA甲基化的功能具有重要的意义。昆虫DNA甲基化需要由DNA甲基化... DNA甲基化是表观遗传学的一个分支学科,因其在调控基因表达和生物体许多生理生化过程具有重要的作用,近年来逐渐受到广泛关注。昆虫由于种类繁多,变态发育和表型复杂,研究DNA甲基化的功能具有重要的意义。昆虫DNA甲基化需要由DNA甲基化转移酶(Dnmts)参与完成,其数量和结构在不同物种中差异较大。大多数昆虫均具有维持DNA甲基化水平的Dnmt1,缺乏行使从头DNA甲基化功能的Dnmt3,Dnmt2(也称为TRDMT1)虽保守存在但其DNA结合的能力极其微弱。昆虫DNA甲基化的总体水平较低,并且呈现不同龄期和组织的时空分布特异性。在昆虫基因组中,以外显子区的DNA甲基化水平最为显著,具有增强基因表达的功能,表现出在序列保守和广泛表达的基因中水平高、在特异表达的基因中水平低的进化特征。目前用于研究昆虫DNA甲基化的方法主要有生物信息学预测和甲基化特异限制性内切酶、甲基化敏感扩增多态性、基因组DNA甲基化测序等实验研究方法。本文就昆虫DNA甲基化转移酶的特性、DNA甲基化的分布与进化及其研究方法进行综述,旨在深入了解昆虫DNA甲基化的研究现状及其重要作用,为促进该研究领域的发展提供新的思路和方法。 展开更多
关键词 昆虫 DNA甲基化 Dnmts 进化 研究方法
昆虫葡萄糖氧化酶的基本特性及功能
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作者 董人富 马小丽 +4 位作者 陈亚琼 戚伟平 尤民生 《环境昆虫学报》 CSCD 北大核心 2015年第2期426-431,共6页
葡萄糖氧化酶(glucose oxidases,GOX)是一种脱氢酶,普遍存在于动物、植物及微生物体内,可以专一性地将β-D-葡萄糖氧化成葡萄糖酸和过氧化氢。昆虫GOX可能是从葡萄糖-甲醇-胆碱氧化还原酶(glucose-methanol-choline oxidoreductases... 葡萄糖氧化酶(glucose oxidases,GOX)是一种脱氢酶,普遍存在于动物、植物及微生物体内,可以专一性地将β-D-葡萄糖氧化成葡萄糖酸和过氧化氢。昆虫GOX可能是从葡萄糖-甲醇-胆碱氧化还原酶(glucose-methanol-choline oxidoreductases)经由葡萄糖脱氢酶(glucose dehydrogenase)进化而来。在昆虫中,GOX主要分布在下唇腺,杂食性昆虫比寡食性、单食性昆虫的GOX活性高。昆虫GOX除了能够调节自身与氧化还原相关的生理活动,在抑制寄主植物防御反应、促进昆虫取食寄主方面具有重要的功能,但同时也能诱发某些植物的防御反应。进一步深入研究GOX在昆虫与植物互作方面的功能,将有助于阐明两者间长期以来的协同进化关系,为农业害虫的防控提供理论依据和新思路。 展开更多
关键词 葡萄糖氧化酶 进化 氧化还原 昆虫食性 植物防御
基因组学时代害虫治理的研究进展及前景 被引量:4
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作者 彭露 +5 位作者 夏晓峰 谢苗 柯富士 尤士骏 黄宇萍 尤民生 《应用昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期1-22,共22页
随着DNA测序技术的不断更新和生物信息学的快速发展,昆虫基因组学的研究与日俱增,提高了人们对种群遗传学和进化生态学的理解和认识,促进了对重要农业害虫的适应性和致害机理的研究,为安全、有效、可持续地开展害虫综合治理提供了新思... 随着DNA测序技术的不断更新和生物信息学的快速发展,昆虫基因组学的研究与日俱增,提高了人们对种群遗传学和进化生态学的理解和认识,促进了对重要农业害虫的适应性和致害机理的研究,为安全、有效、可持续地开展害虫综合治理提供了新思路和新手段。近两年来,全球发布的昆虫基因组数量每年可达30个。在遗传学、生态学和进化论等生命科学基本原理和方法的指导下,基因组学的研究为揭示害虫遗传变异的内在机制、生态适应性策略和种群变动规律提供了重要的数据和信息资源,同时催生了一系列害虫治理新技术和新方法的研发与应用。为了进一步促进和加强基因组时代的害虫治理研究,拓展该领域研究的广度与深度,本文就昆虫基因组的研究,昆虫与植物协同进化模式及其互作机理,昆虫免疫和抗药性分子机制,以及害虫防治新技术等方面进行了综述,旨在为了解基因组时代害虫治理的研究进展及前景提供参考,对进一步改进害虫生态控制的策略和措施也具有指导意义。 展开更多
关键词 昆虫基因组 协同进化 免疫 抗药性 害虫治理
节肢动物ABC转运蛋白及其介导的杀虫剂抗性 被引量:5
9
作者 戚伟平 马小丽 +3 位作者 董人富 尤民生 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期729-736,共8页
腺苷三磷酸结合盒转运蛋白(ATP-binding cassette transporter),简称ABC转运蛋白(ABC transporter),是继细胞色素P450单加氧酶、羧酸酯酶、谷胱甘肽S-转移酶之后又一类参与解毒作用的重要蛋白家族,因其在杀虫剂解毒等方面起着非常... 腺苷三磷酸结合盒转运蛋白(ATP-binding cassette transporter),简称ABC转运蛋白(ABC transporter),是继细胞色素P450单加氧酶、羧酸酯酶、谷胱甘肽S-转移酶之后又一类参与解毒作用的重要蛋白家族,因其在杀虫剂解毒等方面起着非常重要的作用,近年来逐渐受到广泛关注。ABC转运蛋白是一大类跨膜蛋白,其核心结构通常由4个结构域组成,包括2个高度疏水的跨膜结构域(transmembrane domains,TMD)和2个核苷酸结合域(nucleotide binding domains,NBD)。根据序列相似性和保守结构域,可以把ABC转运蛋白家族分为8个亚家族,每个亚家族的成员数及功能不同。这类蛋白在各种生物体内均有分布,其主要功能包括转运物质、信号传导、细胞表面受体及参与细胞内DNA修复,转录及调节基因的表达过程等。此外,近年来的研究表明,ABC转运蛋白的突变或过表达不仅与节肢动物对化学农药的抗药性密切相关,而且在抗Bt毒素方面也起着非常重要的作用,对转Bt作物造成严重威胁。本文综述了节肢动物ABC转运蛋白的结构,ATP水解介导的作用机制,亚家族的分类、结构及生理功能,以及由ABC转运蛋白介导的抗药性研究进展,旨在深入了解ABC转运蛋白的研究现状及其在节肢动物抗药性方面的作用,为阐明节肢动物抗药性机制提供新的理论依据,对改进农业害虫的抗性监测和治理策略也具有一定的指导意义。 展开更多
关键词 节肢动物 ABC转运蛋白 分子结构 亚家族 生理功能 介导抗性
多花水仙花瓣抑制消减杂交cDNA文库的构建及分析 预览 被引量:2
10
作者 炎森 陈晓静 《福建农林大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2013年第3期289-296,共8页
采用抑制消减杂交(SSH)技术,以多花水仙的栽培品种‘黄花水仙2号’黄色花瓣和‘金盏银台’白色花瓣的eDNA分别作为测试子和驱动子,建立正、反向抑制消减杂交cDNA文库.随机挑选正、反向文库各216个阳性克隆测序,对已知功能的uniEST... 采用抑制消减杂交(SSH)技术,以多花水仙的栽培品种‘黄花水仙2号’黄色花瓣和‘金盏银台’白色花瓣的eDNA分别作为测试子和驱动子,建立正、反向抑制消减杂交cDNA文库.随机挑选正、反向文库各216个阳性克隆测序,对已知功能的uniESTs进行基因本体论(GO)分类分析,荧光定量PCR检测部分可能参与色素形成的uniESTs.结果表明:水仙花色差异表达正、反向消减文库经检验质量可靠,为分离花色形成相关基因奠定了基础;GO功能分类分析显示,水仙花色差异可能受到多个代谢途径的影响;经初步筛选得到11个与水仙花色形成相关的uniEST8,为进一步克隆基因全长和功能验证提供参考. 展开更多
关键词 多花水仙 花色 抑制消减杂交
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小菜蛾鞣化激素基因克隆及其功能分析 被引量:3
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作者 马小丽 +5 位作者 尤燕春 李晓静 徐秀凤 胡玉兰 杨广 尤民生 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期1101-1109,共9页
鞣化激素是调节昆虫表皮骨化和翅膀发育的一种神经激素,尽管已经在许多不同种昆虫上克隆了鞣化激素基因,但是关于小菜蛾Plutella xylostella鞣化激素及其基因的研究至今未见报道。本研究克隆了两个小菜蛾鞣化激素基因Pxbursα和Pxbur... 鞣化激素是调节昆虫表皮骨化和翅膀发育的一种神经激素,尽管已经在许多不同种昆虫上克隆了鞣化激素基因,但是关于小菜蛾Plutella xylostella鞣化激素及其基因的研究至今未见报道。本研究克隆了两个小菜蛾鞣化激素基因Pxbursα和Pxbursβ(GenBank登录号分别为KF498645和KF498646)全长cDNA,其序列长度分别为537bp和360bp,与已报道的其他昆虫的鞣化激素氨基酸序列一致性分别为51%~68%和37%~57%。实时定量PCR分析发现Pxbursα和Pxbursβ均在蛹期表达量高,而在幼虫期和成虫期的表达量低。以Pxbursα部分序列的双链RNA(dsRNA)饲喂小菜蛾4龄末期幼虫,发现蛹期Pxbursα的表达受到了显著抑制,小菜蛾的发育停滞在蛹期而无法正常羽化,并最终死亡。由此推测,小菜蛾鞣化激素基因在蛹期的大量表达对其生长发育和羽化具有重要的作用。 展开更多
关键词 小菜蛾 鞣化激素 羽化 基因表达 实时定量PCR RNA干扰
多花水仙花朵全长cDNA文库的构建 预览
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作者 鲁娜 陈晓静 +1 位作者 申艳红 《福建农林大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2013年第5期518-522,共5页
采用SMART技术,以多花水仙‘黄花水仙2号’盛开期花朵为材料,构建其全长cDNA文库,并对文库质量进行鉴定.结果表明,所构建初始文库的滴度为6.30×10^5 cfu·mL^-1,扩增后文库的滴度为1.58×10^8 cfu·mL^-1,重组... 采用SMART技术,以多花水仙‘黄花水仙2号’盛开期花朵为材料,构建其全长cDNA文库,并对文库质量进行鉴定.结果表明,所构建初始文库的滴度为6.30×10^5 cfu·mL^-1,扩增后文库的滴度为1.58×10^8 cfu·mL^-1,重组率为84%,插入片段大小集中在500-2000bp之间,平均长度约970bp,符合eDNA文库的质量标准.可见,所构建的文库比较完整,能够反映黄花水仙花朵盛开期基因的表达情况. 展开更多
关键词 多花水仙 花色 SMART技术 CDNA文库
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2个番木瓜多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白基因的克隆与分析 预览 被引量:1
13
作者 申艳红 陈晓静 +2 位作者 李荣荣 卢秉国 《热带作物学报》 CSCD 2011年第5期 861-865,共5页
采用RT—PCR扩增获得了2个番木瓜果实多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(PGIP)基因eDNA和DNA全长序列,将其命名为CpPGIP21和CpPGIP2。CpPGIP21基因全长为984bp,编码325个氨基酸;CpPGIP2基因全长为1025bp.编码326个氨基酸。2基因均没有内... 采用RT—PCR扩增获得了2个番木瓜果实多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(PGIP)基因eDNA和DNA全长序列,将其命名为CpPGIP21和CpPGIP2。CpPGIP21基因全长为984bp,编码325个氨基酸;CpPGIP2基因全长为1025bp.编码326个氨基酸。2基因均没有内含子序列,核苷酸序列有66.54%的相似性。氨基酸序列有63.53%的相似性。2基因均含有植物PGIP基因编码蛋白特有的亮氨酸重复保守序列LXXLXXLXXLXLXXNXLXGXIPXX。对粥伊基因在不同成熟度番木瓜果实表达量分析发现,2基因4个时期均有表达,而且基本呈现同一表达趋势,绿色期表达量最高,随着果实成熟表达量逐渐降低。 展开更多
关键词 番木瓜 多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(PGIP) 基因克隆 半定量RT—PCR
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番木瓜胚性愈伤组织的诱导及体胚发生 预览 被引量:3
14
作者 蔡雪玲 陈晓静 +1 位作者 申艳红 《福建农林大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2011年第2期 122-127,共6页
以番木瓜的幼胚、下胚轴、叶片和子叶作为外植体,研究不同的激素配比、附加物以及培养方式和条件对胚性愈伤组织和体胚的诱导效果.结果表明,幼胚是胚性愈伤组织和体胚发生的好材料.幼胚最佳诱导培养基为:改良MS+10mg·L^-12,... 以番木瓜的幼胚、下胚轴、叶片和子叶作为外植体,研究不同的激素配比、附加物以及培养方式和条件对胚性愈伤组织和体胚的诱导效果.结果表明,幼胚是胚性愈伤组织和体胚发生的好材料.幼胚最佳诱导培养基为:改良MS+10mg·L^-12,4.D+5mg·L^-1NAA+2mg·L^-1 KT+O.5mg·L^-1BA;最适合的增殖培养基为:改良MS+10mg·L^-12,4_D+2.5mg·L^-1NAA+1mg·L^-1KT+0.5mg·L^-1BA;最佳体胚诱导培养基为:改良Ms+10mg·L^-12,4_D+2mg·L^-1KT;子叶较难诱导愈伤组织,叶片和下胚轴愈伤组织的诱导率较高,但愈伤组织质量较差,体胚发生率极低. 展开更多
关键词 番木瓜 愈伤组织 体胚发生 幼胚
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番木瓜GDP-D-甘露糖焦磷酸化酶基因的克隆及分析 预览 被引量:1
15
作者 申艳红 陈晓静 +1 位作者 卢秉国 《福建农林大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2011年第2期 172-177,共6页
采用cDNA末端快速扩增方法,获得了番木瓜果实GDP-D-甘露糖焦磷酸化酶(GMP)基因的cDNA全长序列,将其命名为CpGMP,GenBank登录号为FJ489652.然后,根据拼接序列设计开放性阅读框上、下游引物,扩增得到了CpGMP基因的开放性阅读框序... 采用cDNA末端快速扩增方法,获得了番木瓜果实GDP-D-甘露糖焦磷酸化酶(GMP)基因的cDNA全长序列,将其命名为CpGMP,GenBank登录号为FJ489652.然后,根据拼接序列设计开放性阅读框上、下游引物,扩增得到了CpGMP基因的开放性阅读框序列和DNA序列.ORF序列编码361个氨基酸,DNA序列包含4个外显子和3个内含子.序列分析表明,番木瓜GMP与大果黄褥花、桃、番茄、拟南芥、水稻GMP的同源性分别为90.30%、89.47%、88.92%、88.09%、85.87%.半定量RT.PCR分析表明,Gp伽P基因随着番木瓜果实的成熟表达量逐渐增加,软化时又逐渐降低. 展开更多
关键词 番木瓜 GDP-D-甘露糖焦磷酸化酶 CDNA末端快速扩增 半定量RT-PCR
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番木瓜果实成熟相关基因的cDNA-AFLP分析及克隆 被引量:8
16
作者 申艳红 陈晓静 +1 位作者 卢秉国 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期1081-1088,共8页
为了探讨番木瓜果实成熟机理,利用cDNA-AFLP技术对破色期和半黄期的番木瓜果实进行基因差异表达分析,获得了50个与果实成熟相关的差异基因片段,其中28个与GenBank数据库中的功能基因同源,分别参与了果实成熟过程中基因表达调控,DNA与蛋... 为了探讨番木瓜果实成熟机理,利用cDNA-AFLP技术对破色期和半黄期的番木瓜果实进行基因差异表达分析,获得了50个与果实成熟相关的差异基因片段,其中28个与GenBank数据库中的功能基因同源,分别参与了果实成熟过程中基因表达调控,DNA与蛋白质合成及运输,蛋白质降解,能量代谢,营养物质代谢和逆境胁迫反应等过程。在差异片段序列基础上设计特异引物,采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术成功克隆了4条差异基因cDNA全长,分别命名为CpGMP、CpPAA1、CpPOD和CpMYB。半定量RT-PCR分析结果表明,随着果实的成熟衰老,4个基因的表达量相应变化,说明其可能参与果实的成熟过程。 展开更多
关键词 番木瓜 果实 成熟 CDNA-AFLP 差异表达 RACE
中国水仙查尔酮异构酶基因的克隆与表达分析 预览 被引量:9
17
作者 蔡雪玲 陈晓静 +2 位作者 叶一江 申艳红 《热带作物学报》 CSCD 2011年第12期 2287-2292,共6页
查尔酮异构酶(CHI)是影响类黄酮合成的一个重要限速酶,在植物花色发育过程中起着重要作用。通过RT-PCR和RACE技术从中国水仙的花瓣中克隆得到3条CHI基因,分别命名为NtCHIW、NtCHIJ和NtCHIY。3个基因均含有一个735 bp的开放阅读框(ORF... 查尔酮异构酶(CHI)是影响类黄酮合成的一个重要限速酶,在植物花色发育过程中起着重要作用。通过RT-PCR和RACE技术从中国水仙的花瓣中克隆得到3条CHI基因,分别命名为NtCHIW、NtCHIJ和NtCHIY。3个基因均含有一个735 bp的开放阅读框(ORF),编码244个氨基酸。氨基酸序列分析表明:白花水仙与金盏银台、黄花水仙、洋葱、粳稻、拟南芥、油棕榈、葡萄相应基因的氨基酸序列同源性分别为93.03%、93.44%、64.75%、55.42%、50.58%、59.43%、58.20%。荧光定量PCR分析表明:随着花开放的过程,中国水仙的CHI基因转录水平发生变化,说明CHI基因可能参与花色变化的过程。 展开更多
关键词 中国水仙 查尔酮异构酶 基因克隆 序列分析 表达分析
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番木瓜PL和β-Gal基因双价反义表达载体的构建 预览 被引量:1
18
作者 申艳红 陈晓静 《福建农林大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2010年第2期 159-163,共5页
在已报道的番木瓜果胶裂解酶(PL)和β-半乳糖苷酶(β-Gal)基因序列的基础上,设计特异引物,分别扩增保守区序列,将其分别反向插入植物表达载体pCAMB IA1301-35S-GUS-Nos的CaMV35S启动子和Nos终止子之间,构建反义表达载体pCP和pCG.然... 在已报道的番木瓜果胶裂解酶(PL)和β-半乳糖苷酶(β-Gal)基因序列的基础上,设计特异引物,分别扩增保守区序列,将其分别反向插入植物表达载体pCAMB IA1301-35S-GUS-Nos的CaMV35S启动子和Nos终止子之间,构建反义表达载体pCP和pCG.然后用2种不同的方法将带有完整启动子和终止子的PL和-βGal基因引入pCAMB IA2301中,获得PL和β-Gal基因的双价植物反义表达载体pCPG,并对2种方法进行比较. 展开更多
关键词 番木瓜 果胶裂解酶 Β-半乳糖苷酶 反义表达载体
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番木瓜肌动蛋白CpActin基因的克隆及其在果肉中的表达 预览 被引量:7
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作者 申艳红 陈晓静 +1 位作者 卢秉国 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期924-929,共6页
以番木瓜果肉为试材,提取总RNA,反转录为双链cDNA。采用cDNA末端快速扩增方法(RACE),获得了番木瓜果肉Aetin基因的全长cDNA序列,将其命名为CpActin,Genbank登录号为FJ696416。CpActln全长cDNA为1533 bp,含有一个1134bp的开放阅读框,编... 以番木瓜果肉为试材,提取总RNA,反转录为双链cDNA。采用cDNA末端快速扩增方法(RACE),获得了番木瓜果肉Aetin基因的全长cDNA序列,将其命名为CpActin,Genbank登录号为FJ696416。CpActln全长cDNA为1533 bp,含有一个1134bp的开放阅读框,编码377个氨基酸,与毛白杨、葡萄、水稻、拟南芥的Actin同源性分别为98.94%、98.67%、96.29%、94.69%。利用邻接法构建了部分高等植物、哺乳动物和真菌的Actin系统进化树,结果表明番木瓜与葡萄的Actin进化距离最小。采用半定量RT-PCR技术分析CpActin基因在不同成熟度番木瓜果实中的表达情况,发现该基因的表达水平没有明显差异,表明CpActln基因可以作为内参,进行番木瓜其他果实基因差异表达的研究。 展开更多
关键词 番木瓜 肌动蛋白 克隆 表达分析
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双T—DNA共转化获得转基因番木瓜 预览 被引量:1
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作者 陈晓静 +2 位作者 叶一江 申艳红 卢秉国 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期397-403,共7页
番木瓜采后期间的迅速软化现象,导致果实的货架期十分短暂。利用RNAi-β-Gal双T—DNA植物表达载体p2301/TFRG,通过农杆菌介导,探索了液体振荡转化法和浸泡转化法对番木瓜胚性愈伤组织共转化效率的影响。经抗生素敏感性测定,将卡那... 番木瓜采后期间的迅速软化现象,导致果实的货架期十分短暂。利用RNAi-β-Gal双T—DNA植物表达载体p2301/TFRG,通过农杆菌介导,探索了液体振荡转化法和浸泡转化法对番木瓜胚性愈伤组织共转化效率的影响。经抗生素敏感性测定,将卡那霉素筛选质量浓度确定为150mg·L^-4在该质量浓度下,2种方法均获得了转基因再生植株,但转化效率仍较低。正交试验结果表明,浸泡转化法中各处理因素的作用大小为:AS质量浓度〉共培养时间=菌液光密度值=侵染时间,最佳共转化组合为:100μmlol·L^-1AS+菌液光密度值0.2+侵染20min+共培养3d。经PCR和Southern杂交检测.所获得的5株再生植株中有2株为共转化的结果,诱导了其中1株生根并移栽。为进一步选育无选择标记基因的抗软化转基因番木瓜奠定了基础。 展开更多
关键词 番爪瓜 果实软化 双T—DNA 共转化植株
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