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IC-RT-PCR检测葡萄卷叶病毒Ⅲ的研究 预览 被引量:2

Study on IC- RT- PCR for Detecting Grapevine Leaf Roll-associated Virus - 3
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摘要 结合ELISA和反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)的特点,引入了另外一种方法,即免疫捕捉反转录聚合酶链式反应(IC-RT-PCR)对葡萄卷叶病毒Ⅲ(GLRaV-3)进行了检测。从免疫捕捉病毒、释放RNA到反转录成cDNA,最后扩增出了约300bp的预期目的片段。为了进一步明确PCR扩增的特异性,将PCR产物连接到pGEM-T载体上,转化大肠杆菌E.coli JM109菌株,通过蓝白斑筛选,获得重组质粒,提取质粒DNA,经酶切对重组质粒进行鉴定,结果得到了含有目的片段的重组质粒。由此证明,IC-RT-PCR检测GIRaV-3结果准确可靠。最重要的是它弥补了ELISA易出现假阴性、假阳性以及RT-PCR提取RNA难等的缺点,不失为病毒检测的新型方法。 The authors detected GLRaV- 3 by immunocapture reverse transcriptase polymerase chain reaction( IC - RT - PCR) through the following steps from capturing virus, releasing RNA, transcribing cDNA to producing the target fragments of about 300bp. To check the specificity and efficiency of GLRaV- 3 cDNA fragments amplified, pGEM - T jointing the PCR products was used to transform E. coli JM109 and the recombinant plasmids were obtained by blue plaque screening. Further characterization by restriction enzyme digestion and PCR showed that the plasmids contained the target fragments, indicating that the technique of IC - RT - PCR was reliable.
作者 陈建军 曹香林 古勤生 张亚冰 刘崇怀 CHEN Jian-jun, CAO Xiang-lin, GU Qin-sheng, ZHANG Ya-bing, LIU Chong-huai (1. College of Life Science, Henan Normal University, Xinxiang 453007, China; 2. Zhengzhou Fruit Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Zhengzhou 450009, China; 3. Agriculture College of Henan University of Sciences and Technology, Luoyang 471003, China)
出处 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2006年第8期 109-112,共4页 Journal of Henan Agricultural Sciences
基金 科技基础性工作专项资金资助项目
关键词 葡萄 卷叶病毒Ⅲ 检测 IC-RT-PCR Grapevine GLRaV-3 Detecting IC-RT-PCR
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共引文献20

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引证文献2

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